本发明涉及细胞学技术领域,更具体而言,一种识别白菜型油菜染色体的寡核苷酸探针套设计及应用。包括以下步骤:S1:获取白菜型油菜R‑o‑18参考基因组中NR‑TR集合;S2:对NR‑TR集合进行统计聚类并得到其白菜型油菜染色体TR阵列数据;S3:获取在白菜型油菜所有染色体均富集的重复序列簇;S4:将得到的重复序列簇的重复序列代表阵列进行分割;S5:将分割后序列分别使用b l astn比对到白菜型油菜R‑o‑18参考基因组,得到覆盖白菜型油菜10条染色体的寡核苷酸探针套。本发明利用白菜型油菜R‑o‑18参考基因组序列信息,通过生物信息学方法分析串联重复序列,设计了白菜型油菜染色体的寡核苷酸探针套,建立了涂染白菜型油菜染色体的技术,该技术能够批量涂染白菜型油菜染色体材料。