[发明专利]一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法在审

专利信息
申请号: 202210322590.4 申请日: 2022-03-30
公开(公告)号: CN114478745A 公开(公告)日: 2022-05-13
发明(设计)人: 李永刚;李伟;刘永东 申请(专利权)人: 南京京达生物技术有限公司
主分类号: C07K14/585 分类号: C07K14/585;C07K1/14;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/02
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 210000 江苏省南京市*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法,包括以下步骤:培养诱导、破菌和分离纯化,所述分离纯化依次包括离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤层析。本发明将离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤层析相结合为组合层析法,即将这三种方法的优点结合起来进行重组PCT蛋白分离纯化,得到的PCT蛋白的纯品纯度大于90%,纯度高为建立免疫学检测方法提供原材料,具有重要意义。离子交换层析、疏水层析和凝胶层析的顺序及实验条件是实现PCT蛋白纯度达到90%以上的关键点。
搜索关键词: 一种 重组 降钙素 pct 分离 纯化 方法
【主权项】:
暂无信息
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京京达生物技术有限公司,未经南京京达生物技术有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/202210322590.4/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种鲑降钙素的制备方法-202310662148.0
  • 周伟;饶金泉;沙益健;王文琪;周逸明;崔颀 - 上海苏豪逸明制药有限公司
  • 2023-06-06 - 2023-10-27 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种鲑降钙素的制备方法,包括步骤:(1)将树脂载体处理后,按照固相合成的方法依次连接具有保护基的氨基酸得到三十二肽树脂;(2)其间依次脱去Fmoc‑保护基团;(3)切肽同时脱侧链保护基团,得还原型粗品;(4)粗品经空气氧化成环反应,并经反相HPLC分离纯化,制得鲑降钙素精品。对于具有Fmoc‑单保护基的Fmoc‑Rink Amide MBHA树脂和氨基酸,以及具有Fmoc‑保护基团和Boc‑或tBu‑或OtBu‑保护基的氨基酸,利用质量含量为25.5‑26.5%的六氢吡啶的DMF溶液进行一次脱除Fmoc‑保护基,对于具有Fmoc‑保护基团和Pbf‑或Trt‑保护基的氨基酸,利用质量含量为23.5‑24.5%的六氢吡啶的DMF溶液进行两次脱除Fmoc‑保护基。本发明的方法对缩合反应、脱侧链保护基团等步骤进行了优化,产品质量好,收率高,可工业化实施。
  • 依降钙素的制备方法-202010838555.9
  • 沈永刚;肖攀;谢振亮;程益明;沈永良;王克霜 - 杭州固拓生物科技有限公司
  • 2020-08-19 - 2023-02-28 - C07K14/585
  • 本发明提供一种依降钙素的制备方法,包括以下步骤:1)由Fmoc‑Pro‑OH与Sieber Amide Resin反应;2)在Fmoc‑Pro‑Sieber Amide Resin树脂上按照依降钙素序列依次偶联至最后一个氨基酸Fmoc‑Ser(tBu)‑OH;3)脱除肽树脂的氨基酸Asu上的侧链保护基OAll,脱除Fmoc得到带侧链保护基的线性依降钙素树脂肽,将带保护基的线性依降钙素从树脂上脱落;4)溶液调节至中性,除去DCM,加入Cl‑HOBT与DIC充分反应;5)加水将带有侧链保护基的环状依降钙素析出,加入裂解液,加入冰乙醚沉淀;6)上制备分离纯化,得到纯度合格的液体依降钙素,将溶液转盐形成醋酸盐,冻干得到精品依降钙素。本发明制备方法简单,在液相条件下进行环化反应,大大提高了粗品纯度,有效提高了依降钙素的收率,降低了成本与“三废”排放。
  • 一种依降钙素的制备方法-202110376991.3
  • 姬胜利;刘超;殷金岗;付午杰 - 润辉生物技术(威海)有限公司
  • 2021-04-08 - 2022-10-04 - C07K14/585
  • 本发明提供一种依降钙素的制备方法,包括以树脂为固相合成载体按照依降钙素氨基酸序列中的Arg23‑Pro31、Lys10‑Pro22和Ser1‑Leu8序列片段分别缩合制备依降钙素肽树脂I、II和III、分别裂解得依降钙素片段I、II和III;依降钙素片段III与H‑Gly‑OtBu缩合得依降钙素肽片段IV、环化得片段V,裂解得片段VI;将依降钙素肽片段I、II和VI按照依降钙素的氨基酸序列顺序缩合得依降钙素肽片段IX、裂解、纯化即得依降钙素。本发明降低了纯化难度,缩短合成周期,降低了投料量,大大降低了物料成本,提高了产品收率,利于大规模生产。
  • 一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法-202210322590.4
  • 李永刚;李伟;刘永东 - 南京京达生物技术有限公司
  • 2022-03-30 - 2022-05-13 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种重组降钙素原PCT的分离纯化方法,包括以下步骤:培养诱导、破菌和分离纯化,所述分离纯化依次包括离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤层析。本发明将离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤层析相结合为组合层析法,即将这三种方法的优点结合起来进行重组PCT蛋白分离纯化,得到的PCT蛋白的纯品纯度大于90%,纯度高为建立免疫学检测方法提供原材料,具有重要意义。离子交换层析、疏水层析和凝胶层析的顺序及实验条件是实现PCT蛋白纯度达到90%以上的关键点。
  • 一种固液结合法制备依降钙素的方法-202110377335.5
  • 姬胜利;殷金岗;刘超 - 润辉生物技术(威海)有限公司
  • 2021-04-08 - 2022-03-29 - C07K14/585
  • 本发明提供一种固液结合法制备依降钙素的方法,其包括:应用Fomc/tBu方法,以Fmoc‑Pro‑CTC树脂为固相合成载体依Gln13‑Pro22片段序列缩合制备依降钙素肽树脂I然后裂解得到依降钙素片段I,以氨基树脂为固相合成载体依Arg23‑Pro31片段序列缩合制备依降钙素肽树脂II,将依降钙素片段I通过固相合成方式缩合至依降钙素肽树脂II上,并按照依降钙素氨基酸序列继续缩合得到依降钙素肽树脂,其中Leu3、Ser4、Leu11、Ser12以假脯氨酸二肽片段的形式进行缩合以引入序列、缩合困难氨基酸Val7以Val7‑Leu8‑Gly9三肽片段进行缩合以引入序列、缩合困难氨基酸Thr5以Thr5‑Asu6二肽片段进行缩合以引入序列。本发明解决了现有技术的生产周期长、生产效率低的问题,丰富了现有合成工艺,同时提高了合成产物纯度和纯化收率,降低了生产成本,利于大规模生产。
  • 一种骨靶向性鲑鱼降钙素及其制备方法-201810457772.6
  • 李建树;刘衍朋;俞鹏;谢婧;李安琦 - 四川大学
  • 2018-05-14 - 2021-07-27 - C07K14/585
  • 本发明提供了一种骨靶向性鲑鱼降钙素,是将鲑鱼降钙素分子中的二硫键打开并与骨靶向性偶联分子共价偶联形成,制备方法如下:(1)制备骨靶向性偶联分子,(2)将鲑鱼降钙素溶解于pH值为5~7的水溶性溶剂中,加入还原剂将鲑鱼降钙素的二硫键还原形成自由巯基,然后加入骨靶向性偶联分子,在0~40℃搅拌反应0.5~12h,将粗产物分离,采用制备型液相色谱纯化,即得骨靶向性鲑鱼降钙素。本发明提供的骨靶向性鲑鱼降钙素不具有细胞毒性和免疫原性,能提高降钙素的骨组织富集能力,可有效修复骨组织,具有广阔的应用前景。
  • 一种抑制人降钙素聚集的方法-201911328765.7
  • 李海玲;叶慧贤;高中洪 - 华中科技大学
  • 2019-12-20 - 2021-04-20 - C07K14/585
  • 本发明属于医药领域,更具体地,涉及一种抑制人降钙素聚集的方法。在人降钙素多肽的12号位酪氨酸进行硝化修饰,使12号位酪氨酸转化为硝基取代的酪氨酸,该方法解决了目前人降钙素由于易于聚集而不能用于临床的问题,这种酪氨酸硝化修饰抑制了人降钙素的聚集,而且不会影响人降钙素本身的生物活性,同时还可以在很长一段时间内保持其生物功能。
  • 用于治疗疾病和病症的降钙素模拟物-201480062032.2
  • 莫滕·卡尔斯达尔;基姆·亨里克森;基姆·菲茨·安德烈亚森 - 关键生物科学有限公司
  • 2014-11-10 - 2020-08-04 - C07K14/585
  • 具有根据SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:53的氨基酸序列的降钙素模拟肽可用作用于治疗以下的药物:糖尿病(I型和/或II型)、体重过重、过度食物摄入、代谢综合征、类风湿性关节炎、非酒精性脂肪肝病、骨质疏松症或骨关节炎、血糖水平调节不良、针对葡萄糖耐量测试之响应调节不良或摄食调节不良,所述氨基酸序列各自可在其N‑末端羧基化,或者以其他方式修饰以降低第一个氨基酸的正电荷,并且独立于此可在其C‑末端酰胺化,并且在每个所述氨基酸序列中,1位和7位的半胱氨酸残基可一起被α‑氨基辛二酸(Asu)替换。
  • 一种降钙素原重组蛋白装置-201921382056.2
  • 肖潇;童坤 - 南京申基医药科技有限公司
  • 2019-08-23 - 2020-06-09 - C07K14/585
  • 本实用新型公开了一种降钙素原重组蛋白装置,包括底座和装置外壳,底座的上端设置有装置外壳,且装置外壳的内部中间设置有反应瓶,反应瓶的顶端设置有若干组瓶管,且若干组瓶管上固定安装有固定盖,固定盖与装置外壳的顶端重合,反应瓶的外部设置有固定片,且固定片的外部设置有转动片,转动片的底端设置有齿轮边,且齿轮边的一侧啮合连接有转动齿轮,装置外壳的内壁四周均固定安装有灯座,且灯座上设置有LED灯和紫外灯。有益效果:通过设置的灯座上的LED灯和紫外灯以及转动片和固定片相互配合,可以在同一装置内对反应瓶进行不同种类的光照和不同强度的光照,操作简单便捷且不耽误降钙素原重组蛋白的反应时间。
  • 肽激素的降钙素CGRP家族的肽拮抗剂和它们的用途-201810931542.9
  • 克里斯托弗·J·索尔斯 - 克里斯托弗·J·索尔斯
  • 2013-01-25 - 2018-12-14 - C07K14/585
  • 实施方式提供修饰的降钙素基因‑相关的肽拮抗剂,其包括修饰的降钙素基因‑相关的肽或相关的蛋白家族成员的N‑端片段,其中N‑端片段的至少2个残基是半胱氨酸(Cys),至少一个氨基酸包含苏氨酸(Thr)残基的非‑苏氨酸取代;中央核心,其中中央核心包含α‑螺旋;及修饰的降钙素基因‑相关的肽或包含C‑端酰胺的相关的蛋白家族成员的C‑端片段,且其中C‑端片段的至少一个氨基酸是苯丙氨酸(Phe),脯氨酸(Pro),酪氨酸(Tyr)或羟脯氨酸(Hyp)或其药学可接受的盐,以及组合物,包括药物组合物,其包含受试肽。实施方式还提供治疗方法,包括治疗偏头痛的方法,所述方法通常涉及给有需求的个体施用有效量的受试肽或组合物。
  • 肽激素的降钙素CGRP家族的肽拮抗剂和它们的用途-201380010942.1
  • 克里斯托弗·J·索尔斯 - 克里斯托弗·J·索尔斯
  • 2013-01-25 - 2018-09-18 - C07K14/585
  • 实施方式提供修饰的降钙素基因‑相关的肽拮抗剂,其包括修饰的降钙素基因‑相关的肽或相关的蛋白家族成员的N‑端片段,其中N‑端片段的至少2个残基是半胱氨酸(Cys),至少一个氨基酸包含苏氨酸(Thr)残基的非‑苏氨酸取代;中央核心,其中中央核心包含α‑螺旋;及修饰的降钙素基因‑相关的肽或包含C‑端酰胺的相关的蛋白家族成员的C‑端片段,且其中C‑端片段的至少一个氨基酸是苯丙氨酸(Phe),脯氨酸(Pro),酪氨酸(Tyr)或羟脯氨酸(Hyp)或其药学可接受的盐,以及组合物,包括药物组合物,其包含受试肽。实施方式还提供治疗方法,包括治疗偏头痛的方法,所述方法通常涉及给有需求的个体施用有效量的受试肽或组合物。
  • 一种鲑鱼降钙素的制备方法-201510594506.4
  • 龙春艳;胡阳 - 四川吉晟生物医药有限公司
  • 2015-09-17 - 2018-08-28 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种鲑鱼降钙素的制备方法,包括将Fmoc‑Pro‑OH与树脂偶联,获得Fmoc‑Pro‑树脂;将Fmoc‑Pro‑树脂与保护氨基酸和保护肽片段逐一偶联获得鲑鱼降钙素线性肽树脂;将鲑鱼降钙素线性肽树脂在裂解液中裂解,得到还原性粗品;将还原性粗品使用氧化剂氧化,得到氧化粗品;将氧化粗品纯化,得到鲑鱼降钙素精品。
  • 降钙素原突变体及其制备方法和用途-201711453987.2
  • 陈庆全;王亚男;封冰;张贺秋;张明程 - 北京市华信行生物科技有限公司
  • 2017-12-28 - 2018-05-29 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种降钙素原突变体,该降钙素原突变体具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列,或者该降钙素原突变体具有将SEQ ID No:1所述的氨基酸序列经过一个或者几个氨基酸残基的取代、缺失或者添加后仍具有降钙素原突变体的稳定性的氨基酸序列;其中所述降钙素原突变体片段结构为降钙素原氨基多肽‑连接臂1‑降钙素‑连接臂2‑降钙蛋白,所述连接臂1为‑Ala‑Gly‑,所述连接臂2为‑Ala‑Gly‑Ala‑Gly‑。本发明还公开了该降钙素原突变体的制备方法和用途。本发明通过对天然降钙素原蛋白中的2个水解位点58‑59aa和92‑95aa进行替换,得到了一种降钙素原突变体,提高了降钙素原体外稳定性。同时本发明采用柔性连接臂替换上述水解位点,使获得的降钙素原突变体保留天然降钙素原蛋白的抗原性。
  • 一种高稳定性重组降钙素原、制备方法及用途-201510085322.5
  • 修冰水;张贺秋;阙海萍;王晓丹;冯晓燕;杨锡琴;张旭辉;刘志强;段翠密 - 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所
  • 2015-02-16 - 2017-08-29 - C07K14/585
  • 本发明提供了一种高稳定性重组降钙素原,该蛋白的结构为PCT氨基多肽‑连接臂1‑降钙素‑连接臂2‑降钙蛋白,氨基酸序列如SEQ ID NO1所示。本发明以柔性肽链连接臂替换了PCT中易于降解的58‑59aa,92‑95aa两部分肽链,采用大肠杆菌优势密码子反向翻译上述抗原的氨基酸序列,获得由大肠杆菌优势密码子组成的高稳定性PCT抗原基因,然后进行克隆表达,获得高稳定性PCT抗原。相比野生型PCT,该抗原除了具有更高稳定性,还保持了野生PCT的抗原性。本发明提供的高稳定性PCT蛋白基因是采用大肠杆菌优势密码子组成,在大肠杆菌中的具有较高的表达量,适合大量制备。同时重组PCT可用于免疫检测中标准品的制备及标准曲线的绘制,从而实现对PCT含量的准确定量。
  • 一种斑点雀鳝来源的降钙素及其应用-201710131506.X
  • 杨生生;焦炳华;石琼;彭超;杨家安;胡杰伟;蔡在龙 - 中国人民解放军第二军医大学
  • 2017-03-07 - 2017-07-18 - C07K14/585
  • 本发明具体涉及一种斑点雀鳝来源的降钙素及其应用。本发明所涉及该降钙素的氨基酸序列:Cys‑Ser‑Asn‑Leu‑Ser‑Thr‑Cys‑Val‑Leu‑Gly‑Lys‑Leu‑Ser‑Gln‑Glu‑Leu‑His‑Lys‑Leu‑Gln‑Thr‑Phe‑Pro‑Arg‑Thr‑Asp‑Val‑Gly‑Ala‑Ser‑Thr‑Pro‑NH2,其中,Pro‑NH2表示脯氨酰胺,第1和第7位上的两个Cys残基由一个二硫键相连,可以采用Fmoc固相合成法进行合成。本发明的斑点雀鳝来源的降钙素能够用于制备调节体内钙、磷代谢的药物或用于制备治疗或预防骨代谢和/或钙代谢紊乱相关疾病的药物。因此,本发明也涉及一种将斑点雀鳝来源的降钙素作为基本组分的药物组合物。
  • 一种鸭嘴兽来源的降钙素及其应用-201710131391.4
  • 蔡在龙;杨生生;胡杰伟;陈圆圆;俞瑾;李安吉 - 中国人民解放军第二军医大学
  • 2017-03-07 - 2017-06-20 - C07K14/585
  • 本发明具体涉及一种鸭嘴兽来源的降钙素及其应用。本发明所涉及该降钙素的氨基酸序列Cys‑Ser‑Asn‑Leu‑Ser‑Thr‑Cys‑Val‑Leu‑Gly‑Lys‑Leu‑Ser‑Gln‑Glu‑Leu‑His‑Lys‑Leu‑Gln‑Thr‑Asn‑Pro‑Arg‑Thr‑Asp‑Val‑Gly‑Ala‑Gly‑Thr‑Pro‑NH2,其中Pro‑NH2表示脯氨酰胺,第1和第7位上的两个Cys残基由一个二硫键相连,可以采用Fmoc固相合成法进行合成。本发明的鸭嘴兽来源的降钙素能够用于制备调节体内钙、磷代谢的药物或用于制备治疗或预防骨代谢和/或钙代谢紊乱相关疾病的药物。因此,本发明也涉及一种将鸭嘴兽来源的降钙素作为基本组分的药物组合物。
  • 一种纯化鲑降钙素的方法-201611049524.5
  • 秦敬国;徐红岩 - 吉尔生化(上海)有限公司
  • 2016-11-25 - 2017-03-08 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种利用反相高效液相色谱法纯化鲑降钙素的方法,主要解决目前没有一条适于工业化生产纯化醋酸鲑降钙素的方法的技术问题。本发明技术方案包括如下步骤1)将鲑降钙素粗品溶液以滤膜过滤后,以C8或C18反相硅胶柱,流动相A相为体积百分比0.1%甲酸水溶液,B相为体积百分比0.1%甲酸乙腈,进行梯度洗脱收集目标峰;2)利用HPLC转成醋酸盐;3)将所得溶液减压旋蒸浓缩后冷冻干燥得到粉末状成品肽。本发明的方法工艺简单,环境污染低,收率高,便于工业化实施。
  • 片段缩合制备醋酸鲑鱼降钙素的方法-201410420967.5
  • 常民;王锐;彭雅丽;薛宏祥 - 兰州大学
  • 2014-08-25 - 2017-02-08 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种片段缩合制备醋酸鲑鱼降钙素的方法,所述方法包括以下步骤1)采用固相合成法,在固相载体上合成鲑鱼降钙素的片段序列,第1‑10位、第11‑23位、第24‑32位或第24‑31位氨基酸;2)在液相依次偶联片段形成全保护鲑鱼降钙素;3)裂解全保护鲑鱼降钙素得到鲑鱼降钙素粗肽,高效液相纯化换盐得到醋酸鲑鱼降钙素纯肽。本发明利用固液相结合片段缩合的方法制备醋酸鲑鱼降钙素,提高了产率和纯度,成本低,利于大规模生产。
  • 醋酸鲑降钙素的制备方法-201310213820.4
  • 路兵;徐伟;张鸿雁 - 青岛国大生物制药股份有限公司
  • 2013-05-31 - 2013-08-21 - C07K14/585
  • 本发明公开了一种醋酸鲑降钙素的制备方法,包括以下步骤:用脱保护试剂将Rink Amide MBHA树脂脱保护,去Fmoc保护基团;以脱保护后的Rink Amide MBHA树脂为起始原料,以Fmoc保护的氨基酸为单体,依次耦联氨基酸,得到醋酸鲑降钙素肽树脂;缩合剂为DIC/HOBt或者PyBOP/HOBt;裂解所述醋酸鲑降钙素肽树脂,然后加入乙醚沉淀所述醋酸鲑降钙素肽树脂,得到还原型醋酸鲑降钙素粗肽;将所述还原型醋酸鲑降钙素粗肽环化得到氧化型醋酸鲑降钙素粗肽;将所述氧化型醋酸鲑降钙素粗肽纯化、转盐、浓缩和冻干得到醋酸鲑降钙素。本发明的醋酸鲑降钙素的收率达20%以上。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top