[发明专利]一种高效水酶的克隆技术应用方法在审

专利信息
申请号: 202110403100.9 申请日: 2021-04-15
公开(公告)号: CN113174396A 公开(公告)日: 2021-07-27
发明(设计)人: 杨富民 申请(专利权)人: 湛江市享爱食品有限公司
主分类号: C12N15/57 分类号: C12N15/57;C12N15/56;C12N15/75;C12N15/81;C12N9/50;C12N9/42
代理公司: 佛山帮专知识产权代理事务所(普通合伙) 44387 代理人: 颜春艳
地址: 524000 广东省湛江市赤*** 国省代码: 广东;44
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种高效水酶的克隆技术应用方法,所述克隆技术应用方法包括如下步骤:根据工业霉菌和细菌的基因组分析,挑选出不同蛋白酶和几丁质酶的基因,放置在准备容器中备用;盐析,将基因的水溶液中加入中性盐中,随着盐浓度增大而使重组酶沉淀出来,然后通过离子交换技术以及亲和层析的技术对重组酶的分离纯化;水解效果测试,制备线性化克隆载体。该方法的有益效果是:该种高效水酶的克隆技术应用方法,操作方便,便于挑选较高水解效果的重组蛋白酶,便于对重组蛋白酶的水解效果进行对比判断,方便工作者进行重组蛋白酶的克隆,方便使用者进行操作,具有广阔的市场前景,适合推广使用。
搜索关键词: 一种 高效 克隆技术 应用 方法
【主权项】:
暂无信息
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湛江市享爱食品有限公司,未经湛江市享爱食品有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/202110403100.9/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 人源化二肽基肽酶IV(DPP4)动物-202010059426.X
  • C·凯拉瑟斯;A·穆伊卡 - 再生元制药公司
  • 2015-05-28 - 2023-09-22 - C12N15/57
  • 本发明涉及人源化二肽基肽酶IV(DPP4)动物。本发明提供了包含人DPP4核酸序列或人源化DPP4核酸序列的非人动物。描述了包含用人DPP4基因或人源化DPP4基因对内源Dpp4基因进行的置换的非人动物,或者除了内源Dpp4基因之外还包含人DPP4基因或人源化DPP4基因的非人动物。还提供了包含处于人或非人DPP4调控元件控制下的人DPP4基因或人源化DPP4基因的非人动物,包括在内源非人Dpp4基因座处用人DPP4编码序列置换非人Dpp4编码序列的非人动物。提供了包含人DPP4基因或人源化DPP4基因序列的非人动物,其中所述非人动物是啮齿动物。描述了用于制备和使用所述非人动物的方法。
  • OsAP79基因诱导水稻抗褐飞虱的应用-202210341609.X
  • 邱永福;李晶莹;曹振宇 - 广西大学
  • 2022-03-29 - 2023-09-19 - C12N15/57
  • 本发明属于生物技术领域,涉及水稻OsAP79基因诱导水稻抗褐飞虱的应用,本申请研究的是水稻OsAP79基因对水稻褐飞虱抗性作用。本发明通过在OsAP79基因上游加入CaMV35S启动子,构建OE超表达载体转化感虫水稻品种,使得OsAP79基因大量转录和翻译,实现基因产物的过表达,增强水稻对褐飞虱的抗性。证明OsAP79可以通过将该片段加入CaMV35S启动子转入植物体,转基因植物对褐飞虱的抵抗能力显著增强。
  • 一种高活性凝血因子IX突变体、重组蛋白与融合蛋白的制备与应用-202310417526.9
  • 王学锋;武文漫;丁秋兰;董飚 - 四川至善唯新生物科技有限公司
  • 2016-10-14 - 2023-09-12 - C12N15/57
  • 本发明涉及一种高活性凝血因子IX突变体、重组蛋白与融合蛋白的制备与应用,突变体核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。制备方法包括如下步骤:(1)将凝血因子IX基因连入载体中,得到重组载体;(2)将上述重组载体转化宿主细胞,得到表达突变凝血因子IX蛋白细胞克隆;(3)于无血清培养基中连续灌流培养上述细胞克隆,诱导重组高活性凝血因子IX突变蛋白的表达;(4)分离纯化、过滤,最后灌装、冻干,即得。本发明证实了IX突变Arg384Gln确实导致凝血因子IX活性升高,而且没有导致除凝血机制异常之外的其他危害,对人体是安全的,打破了现有研究的技术偏见,具有很好的基因治疗和替代治疗前景。
  • USP11在抑制细胞因子IL6降解中的应用-202210308116.6
  • 祁小飞 - 苏州大学
  • 2022-03-27 - 2023-08-01 - C12N15/57
  • IL6是一种重要的细胞因子,在抗感染,肿瘤免疫,免疫细胞发育等过程中发挥着重要的作用,因此维持一定水平的IL6水平,使其免于过早被降解在上述过程中显得非常重要。USP11是参与机体泛素化过程的基因,研究发现其在多种肿瘤中表达异常,未见其参与IL6降解的研究。本发明公开了USP11新的功能‑保护IL6避免降解的作用,为抗感染和肿瘤的治疗提供新的靶点与思路。
  • 一种花生蛋白酶基因AhSBT1.7及其在花生抗青枯病中的应用-202310247962.6
  • 庄宇慧;陈坤;陈华;蔡铁城;杨强;张冲;王利辉;庄伟建 - 福建农林大学
  • 2023-03-15 - 2023-07-25 - C12N15/57
  • 本发明公开了一种花生蛋白酶基因AhSBT1.7及其在花生抗青枯病中的应用,本发明涉及植物基因工程技术领域,公开了一种花生蛋白酶基因AhSBT1.7,该基因核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本方案通过Gateway系统构建CaMV 35S启动子驱动AhSBT1.7的过量表达载体并转化烟草的感青枯病品种红花大金元,及对转基因植株进行分子检测和青枯菌接种鉴定,结果表明蛋白酶基因AhSBT1.7在烟草中超量表达可显著提高转基因烟草对青枯病的抗性,表明AhSBT1.7可能参与了植物对青枯病的抗性反应;本发明为利用基因工程手段培育抗青枯病花生等新品种提供了重要的基因资源,具有重要的应用前景。
  • 一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法-202210279685.2
  • 徐振上;王婷;夏雪奎;王家朋;赵佩佩 - 齐鲁工业大学
  • 2022-03-21 - 2023-06-23 - C12N15/57
  • 本发明提供了一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法,主要提供了一种溶葡萄球菌酶编码基因Opt‑Lys的核苷酸序列,如SEQ ID NO.1所示;大肠杆菌重组菌产溶葡萄球菌酶的方法,包括如下步骤将大肠杆菌重组菌接至含有氨苄青霉素以及终浓度为48‑51mM甘氨酸的LB培养基中,培养到OD600nm至0.25‑0.35后,添加终浓度为0.8‑1.1g/L的乳糖,并在36‑37℃、180‑200rpm培养35‑37h,固体分离,取上清即是溶葡萄球菌酶发酵液。在本发明中,仅通过对溶葡萄球菌酶编码基因的密码子优化,即可实现了其在大肠杆菌中的分泌表达。
  • 产亮氨酸氨肽酶的基因、枯草芽孢杆菌、构建方法和应用-202211129819.9
  • 张海灵;孙利芹;朱雅清;单守水;安志强;李文康 - 烟台大学
  • 2022-09-16 - 2023-06-23 - C12N15/57
  • 本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及产亮氨酸氨肽酶的基因、枯草芽孢杆菌、构建方法和应用,本发明通过分析鉴定,筛选栖土曲霉的亮氨酸氨肽酶的基因,以pP43NMK为出发质粒成功构建pP43NMK‑lap重组质粒,通过化学转化的方法导入到枯草芽孢杆菌WB800基因组中,获得重组枯草芽孢杆菌B.subtills WB800/pP43NMK‑lap菌株,构建该酶的枯草芽孢杆菌异源表达系统,确定亮氨酸氨肽酶优化条件,为以后大规模发酵生产亮氨酸氨肽酶打下基础,提供一种安全、绿色、无污染、可用于食品加工的方法。
  • 调控水稻形成单倍体诱导系的基因OsECS及其应用-202310182797.0
  • 孙蒙祥;史册;张雪成 - 武汉大学
  • 2023-02-27 - 2023-06-06 - C12N15/57
  • 本发明公开了一种水稻单倍体诱导基因OsECS及其在制备水稻单倍体植株中的应用。在敲除或沉默水稻基因组中的OsECS基因,得到水稻单倍体诱导系,再将水稻单倍体诱导系进行自交,经过表型筛选后得到自交后代单倍体。水稻中OsECS基因在编码区发生突变后,在自交过程中能够产生单倍体诱导能力。本发明的单倍体诱导基因OsECS对于选育新型高诱导率的诱导基因以及提高作物单倍体育种效率方面具有重要的应用潜力。
  • 一种小鼠PHEX基因SNP位点及其应用-202110823606.5
  • 徐潮;赵家军 - 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院)
  • 2021-07-21 - 2023-05-23 - C12N15/57
  • 本发明公开了一种小鼠PHEX基因SNP位点及其应用,本发明通过对XLHR患者及其家系进行基因筛查,在PHEX基因的第12号外显子上发现一个突变位点(c.T1349C),随之通过CRISPR/Cas9技术对小鼠PHEX基因第12号外显子相应位点进行基因编辑引入突变位点,可以获得具有X连锁低血磷性佝偻病患者的临床表型(如低血磷、高尿磷、四肢及尾巴短小、骨骼矿化异常等)的小鼠,利用该小鼠模型可以筛选治疗或预防X连锁低血磷性佝偻病药物。
  • 血凝酶及其筛选方法、应用-202211177006.7
  • 胡波;赵庆香;刘辉;石宁;郑伟华 - 北京康辰药业股份有限公司
  • 2022-09-26 - 2023-05-16 - C12N15/57
  • 本申请涉及血凝酶及其筛选方法、应用,所述血凝酶具有氨基酸序列,所述氨基酸序列通过如SEQ ID NO.1所示的血凝酶Ι的氨基酸序列突变得到,所述血凝酶的氨基酸序列的突变位点包括:第9位突变为Thr和第216位突变为Cys。本申请的血凝酶具有较高的酶活性,且血凝酶的氨基酸序列中,编码单链糖蛋白的成熟蛋白含有236个氨基酸,单链糖蛋白的分子量为28kDa~38kDa,含13个半胱氨酸,形成六对二硫键,表明编码上述氨基酸的基因序列能够处理蛋白的折叠,实现血凝酶基因在哺乳动物细胞中的表达,且具有较高的酶活性,进而可用于止血、凝血药物中。
  • 一种编码大豆FtsH金属蛋白酶基因GmFtsH25及其应用-202111183353.6
  • 喻德跃;王莉;杨宇明;黄方 - 南京农业大学
  • 2021-10-11 - 2023-05-12 - C12N15/57
  • 本发明公开了一种编码大豆FtsH金属蛋白酶基因GmFtsH25及其应用。GmFtsH25的编码区(CDS)核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,并且利用根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化方法创制GmFtsH25过表达转基因植株。本发明公开了一种编码大豆FtsH金属蛋白酶基因GmFtsH25的用途,发现与对照植株相比,过表达该基因可以显著提高转基因植株的净光合速率。因此本发明公开的基因可作为目的基因导入植物,调节转基因植物的光合作用能力,对培育高光效大豆新品种有重要意义。
  • 自身炎症性疾病相关基因TNFAIP3的突变基因及其应用-201911029526.1
  • 杨军;何庭艳;黄艳艳;夏宇;罗书立;史丽娜 - 深圳市儿童医院
  • 2019-10-28 - 2023-05-09 - C12N15/57
  • 本发明公开了自身炎症性疾病相关基因TNFAIP3的突变基因及其应用,更具体来说涉及的应用为该突变基因作为疾病诊断标志物的应用和该突变基因作为疾病治疗靶点的应用。本发明发现了TNFAIP3基因的一种新的突变形式,即TNFAIP3 c.258_261del(p.C86Wfs*8)。该突变位于TNFAIP3基因的第2外显子中,缺失了4个核苷酸,从而引起了移码并提前终止。本发明还保护特异突变作为疾病标志物的应用或者特异突变作为疾病治疗靶标的应用。本发明的发现为解析自身炎症性疾病的致病机制提供了依据,也为自身炎症性疾病临床诊断和治疗提供了新的方向。
  • 一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法-201911251430.X
  • 吴珍芳;贺晓燕;石俊松;谈成;罗绿花;余婉娴 - 温氏食品集团股份有限公司
  • 2019-12-09 - 2023-05-02 - C12N15/57
  • 本发明属于动物体细胞克隆方法领域,具体涉及一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法。本发明方法主要构思是联合调控克隆早期胚胎的组蛋白泛素化、组蛋白H3第9位赖氨酸上三甲基化(H3K9me3)和组蛋白H3第4位赖氨酸上三甲基化(H3K4me3)修饰程度以提高猪克隆胚胎发育效率的方法;所述联合调控指同时降低组蛋白泛素化、H3K9me3和H3K4me3修饰程度。本发明的方法主要操作方法为:获得猪体细胞克隆胚;获得外源mRNA;将外源mRNA导入克隆胚。本发明的方法同时过表达USP29、KDM4A和KDM5B基因,极显著提高了猪克隆胚胎发育的囊胚率和囊胚内总细胞数,并且使克隆猪的出生效率提高3.82倍。
  • 转胰蛋白酶原基因在家蚕丝胶层表达制备自脱胶蚕丝中的应用-202210896130.2
  • 夏庆友;王日远;王元成;田弛;宋建欣;赵萍 - 西南大学
  • 2022-07-27 - 2023-04-11 - C12N15/57
  • 本发明公开了转胰蛋白酶原基因在家蚕丝胶层表达制备自脱胶蚕丝中的应用,通过将转胰蛋白酶原基因由丝胶层特异启动子控制胰蛋白酶原在家蚕丝胶层表达,获得转胰蛋白酶原整合的基因工程丝的自脱胶蚕丝,该蚕丝能够在温和的条件下有效地去除丝胶蛋白层,而且与热碱法丝素相比,自脱胶丝素具有更好的物理结构和机械性能,其他指标如平均当量直径、机械性能和平滑度等,都明显优于传统的热碱法获得的丝纤维,而且受到的损伤较小,从自脱胶蚕丝降解下来的丝胶多肽具有较强细胞增殖能力和良好的生物安全性,未来在纺织工业和医学领域具有广阔的应用前景。
  • PRSS56蛋白表达和酶活调控在近视治疗中的应用-202210942937.5
  • 王红艳;周翔宇;王为民;曾炜佳 - 复旦大学附属妇产科医院
  • 2022-08-08 - 2023-04-04 - C12N15/57
  • 本发明涉及PRSS56蛋白表达和酶活调控在近视治疗中的应用。本发明通过全基因组连锁分析、单倍型分析、全基因组测序联合Sanger测序验证的方法,针对两个遗传性高度近视大家系和236例儿童早发高度近视病例进行致病位点检测和验证,结合家系的遗传模式,突变基因频率和动物模型等数据,证实在PRSS56基因翻译起始上游启动子区域c.‑187GT,c.‑187GC,c.‑297CT,c.‑378GA,c.‑382CT和c.‑421GA突变可导致遗传性高度近视的发生,该突变为常染色体杂合突变,基于此提供了检测以上突变位点的遗传性高度近视筛查试剂盒和高度近视动物模型。应用本发明的动物模型和试剂盒能为遗传性高度近视的早期诊断、鉴别诊断及药物治疗提供科学依据,有利于早期预防和治疗,提高患者生存质量。
  • GhASPG1基因在调控棉花耐盐胁迫中的应用-202211159075.5
  • 王寒涛;张琪;魏恒玲;马亮;付小康;喻树迅;芦建华;康萌 - 中国农业科学院棉花研究所
  • 2022-12-28 - 2023-03-31 - C12N15/57
  • 本发明提供了一种GhASPG1基因在调控棉花耐盐胁迫中的应用,GhASPG1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,编码多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,GhASPG1基因提高棉花的耐盐胁迫;重组质粒含有GhASPG1基因片段,开放阅读框具有如SEQ ID NO.3所示的序列;重组载体包括GhASPG1基因和载体,载体为PYL156;本发明从荧光定量结果表明该GhASPG1基因与盐胁迫相关,从陆地棉TM‑1中克隆出棉花GhASPG1基因,该基因构建病毒诱导的沉默复合体,侵染棉花,测定了丙二醛和脯氨酸的含量,证实了沉默该基因降低了棉花的耐盐胁迫能力。
  • GmOTSa基因在植物抗逆境中的应用-202211365537.9
  • 纪巍;郭京松;王思博;王安怡;陈瑞雪;郭昱;蒋昭文;彭艳艳 - 东北农业大学
  • 2022-11-02 - 2023-03-28 - C12N15/57
  • 本发明公开GmOTSa基因在植物抗逆境中的应用,属于植物育种的技术领域。为了提供一种可以同时抗干旱的植株。本发明一种培育抗逆植株的方法:步骤1:将GmOTSa基因与pFGC5941载体连接,获得重组载体;步骤2:将步骤1所述的重组载体转化至农杆菌中,获得重组农杆菌;步骤3:将步骤2所述的重组农杆菌转入植物中获得转基因植株,鉴定后获得阳性的转基因植株。为植物在逆性的环境下的育种奠定扎实的基础。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top