[发明专利]一种定量检测人类血浆中DPP-4酶活性的方法在审
| 申请号： | 201910653533.2 | 申请日： | 2019-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN110426518A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 胡国清;祝永琴;熊垚;汤丽英 | 申请（专利权）人： | 宁波熙宁检测技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/573 | 分类号： | G01N33/573;G01N33/58 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 315103 浙江省宁波市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及一种定量检测人类血浆中DPP‑4酶活性的方法，主要包括温度平衡、加质控样品和待测样品并封板孵育、加标准样品并封板孵育、加甘氨酸‑脯氨酸‑7‑氨基‑4‑甲基香豆素氢溴酸盐并封板孵育、两次读板的操作步骤，具有检测周期短、操作便捷、检测准确灵敏的特点。 | ||
| 搜索关键词： | 封板 孵育 定量检测 人类血浆 酶活性 氨基 分析检测技术 甲基香豆素 标准样品 待测样品 氢溴酸盐 温度平衡 脯氨酸 甘氨酸 检测 读板 加质 灵敏 | ||
【主权项】：
1.一种定量检测人类血浆中DPP‑4酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：①、开始实验前将各试剂和待测样品放在室温平衡；②、加50μL/孔的质控样品和待测样品到检测孔板中，每个待测样品4个孔；③、每个待测样品的2个孔作为对照孔，加入10μL/孔的抑制剂工作液；另外两个孔作为测试孔，加入10μL/孔1×PBS缓冲液，用封板膜封板，37℃孵育10±2min；④、加配制好的7‑氨基‑4‑甲基香豆素的标准样品100μL/孔到空白检测孔板中，复孔2个操作；⑤、加40μL/孔的甘氨酸‑脯氨酸‑7‑氨基‑4‑甲基香豆素氢溴酸盐到质控样品和待测样品孔中；⑥、用封板膜封板，37℃孵育10±1min后用酶标仪在Ex/Em＝355/460nm读板；⑦、读板后用封板膜封板，37℃孵育30±2min后在Ex/Em＝355/460nm再次读板；待测样品和质控样品的DPP‑4酶活性的计算方式如下：酶活性(μU/mL)＝B/((T2‑T1)×V)×样品稀释倍数其中，T2‑T1为第二次读板前37℃下的孵育时间，单位为min；V为加入检测孔板中的样品体积，单位为mL；B为第二次和第一次读板间产生的7‑氨基‑4‑甲基香豆素的物质的量，单位为pmol，其计算方法为使用ΔRFU作为信号值经7‑氨基‑4‑甲基香豆素标准曲线回算出的浓度乘以每孔的体积，其浓度单位为nM，体积单位为mL；ΔRFU＝(RT2‑RB2)‑(RT1‑RB1)其中，RT2和RB2分别为第二次读板时加入1×PBS缓冲液和抑制剂工作液的复孔信号值的平均值；RT1和RB1分别为第一次读板时加入1×PBS缓冲液和抑制剂工作液的复孔信号值的平均值。
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- 2018-07-30 - 2019-05-07 - G01N33/573
- 本实用新型属于医疗器械装置技术领域，特别涉及一种超氧化物歧化酶测定试剂盒。该超氧化物歧化酶测定试剂盒，包括盒体，其特征是：所述盒体顶部设有盒盖，盒体内设有一第一试剂瓶和若干第二试剂瓶，第二试剂瓶与盒体之间设有内衬块。本实用新型的有益效果是：试剂单元组合方便，可以组成不同包装规格的单盒试剂；在不改变试剂盒大小的情况下，只需要改变内衬块的大小，就能将试剂单元放置牢固，避免在运输过程中由于挤压可能导致的试剂盒变形、试剂瓶漏液等问题，节约成本，方便运输。
- 一种测量肌酸激酶同工酶含量的改良型试剂制备方法-201910095687.4
- 杨苏民;邹志良 - 河北艾欧路生物科技有限责任公司
- 2019-01-31 - 2019-05-03 - G01N33/573
- 本发明公开了一种测量肌酸激酶同工酶含量的改良型试剂制备方法，包括两种试剂分别为：R1试剂和R2试剂，R1试剂由咪唑、D(+)‑葡萄糖、二乙三胺五乙酸、亚硫酸钠、醋酸镁、ADP‑K、AMP、N‑乙酰半胱氨酸、NaDP‑Na、A5‑PP、NaN3、已糖激酶和G6‑P‑DH组成，R2试剂由CAPSO free acid、D(+)‑葡萄糖、CREATINE PHOSPHATE和NaN3组成。本发明的试剂采用免疫抑制法，用抗人M血清抑制M亚单位，然后测定剩余的B亚单位活性，在340nm的波长下测量B亚单位活性在做相应运算即得CK‑MB活性，本试剂直接采用CKMB抗体直接反应避免了现有技术在一系列处理过程中带来的干扰，增加了监测数据的精度。
- 一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒-201910120115.7
- 洪桢;周东;屈波;王锐;屈珏 - 四川大学华西医院
- 2019-02-18 - 2019-04-26 - G01N33/573
- 本发明公开了一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒，试剂盒包括包被微球、生物素标记的检测抗体、链霉素‑R藻红蛋白、反应缓冲液和反应稀释液；其中，包被微球包括包被TIMP‑1捕获抗体的微球、包被MMP2捕获抗体的微球、包被MMP3捕获抗体的微球和包被MMP9捕获抗体的微球，且包被不同捕获抗体的微球具有不同的颜色编码；检测抗体包括TIMP‑1检测抗体、MMP2检测抗体、MMP3检测抗体和MMP9检测抗体；反应缓冲液为弱碱性的PBS缓冲液；稀释缓冲液为包括0.05wt％～0.15wt％BSA的PBS缓冲液，其pH值为7.0～7.5。采用本发明中的试剂盒，可以达到及时发现并准确诊断癫痫的目的。
- 一种完全均相测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒及其方法-201811579917.6
- 刘忠贵;李民友;张玲;罗宁;高国全;杨霞;段朝晖 - 广州市进德生物科技有限公司
- 2018-12-21 - 2019-04-19 - G01N33/573
- 本发明属于生物技术领域，公开了一种完全均相测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒及其方法。本发明利用空间邻近化学发光技术实现完全均相检测脂蛋白相关磷脂酶A2，它基于双夹心技术，两单克隆抗体分别结合在脂蛋白相关磷脂酶A2分子的抗原决定簇上；将校准品或待测样本、辣根过氧化物酶标记的抗人脂蛋白相关磷脂酶A2抗体、吖啶酯标记的抗人脂蛋白相关磷脂酶A2抗体一起加入到微孔板中，无需包被，孵育后两单克隆抗体与样本中的抗原形成抗体‑抗原‑抗体夹心复合物，不需要洗涤过程，加入触发剂后，连续检测一段时间内的发光强度值，并计算样本中脂蛋白相关磷脂酶A2的含量。该试剂盒具有质量稳定、检测快速便捷、灵敏度高、特异性强的特点。
- 用于预测体重减轻程度的生物标志物-201580040231.8
- J·哈格尔;I·伊林奇瓦;A·瓦尔塞西亚;W·萨里斯;A·阿斯楚普 - 雀巢产品技术援助有限公司
- 2015-06-29 - 2019-04-19 - G01N33/573
- 本发明涉及一种用于预测可通过向受试者应用一种或多种膳食干预而获得的体重减轻程度的方法，所述方法包括确定得自所述受试者的一个或多个样品中一种或多种生物标志物的水平，其中所述生物标志物选自果糖胺和因子VII。
- 一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法-201811298267.8
- 田永帅;唐灿 - 深圳天辰医疗科技有限公司
- 2018-11-01 - 2019-04-12 - G01N33/573
- 本发明属于体外检测技术领域，具体涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法。本发明所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括：磁分离试剂和酶标记抗体；磁分离试剂包括：表面上结合有第一抗CK‑MB单克隆抗体和第二抗CK‑MB单克隆抗体的磁微粒；酶标记抗体包括：酶标记的第三抗CK‑MB单克隆抗体；和/或，酶标记的第四抗CK‑MB单克隆抗体；其中，第一、第二、第三和第四抗CK‑MB单克隆抗体分别特异于肌酸激酶同工酶的不同表位。本发明磁分离试剂中的磁微粒的表面上结合有特异于肌酸激酶同工酶的不同表位的第一抗CK‑MB单克隆抗体和第二抗CK‑MB单克隆抗体，可实现多位点识别待测样品中的CK‑MB抗原，增强磁珠抗体与抗原的结合，可避免漏检的情况，灵敏度高，适用人群广泛。
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