[发明专利]一种定量检测液体样品中汞离子的方法及试剂盒

摘要

本发明提供了一种定量检测液体样品中汞离子的方法及一种汞离子定量检测试剂盒，利用本发明提供的基于生物传感器和微滴PCR技术的定量检测方法和检测试剂盒可以实现对汞离子的绝对定量检测，定量检测限可达到40fmol，灵敏度可达到10fmol，能够满足汞离子实际检测的需要。此外，本方法操作简单，灵活性强，是一种实现汞离子绝对定量检测的有效方法。

主权项

1.一种定量检测液体样品中汞离子的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)以待测液体样品为模板溶液，利用汞离子生物传感器进行等温PCR扩增获得含有等温PCR扩增产物的扩增后体系；(2)利用超纯水对所述扩增后体系进行10⁸倍稀释，获得最终的稀释后物料，以所述稀释后物料作为模板溶液，利用微滴PCR扩增引物和探针进行微滴PCR扩增，采集微滴PCR扩增产生的荧光信号，依照阴性孔的荧光确定荧光阈值以得到阳性扩增孔数；(3)利用公式I计算每个扩增后体系中等温PCR扩增产物的拷贝数，公式I中，A为扩增后体系中等温PCR扩增产物的拷贝数，N₀为总扩增孔数，X为阳性扩增孔数；公式I：A＝‑ln[(N₀‑X)/N₀]×N₀(4)利用公式Ⅱ计算样品中汞离子的浓度，公式Ⅱ中，n为生物传感器中可形成T‑Hg‑T结构的数量，A为扩增后体系中等温PCR扩增产物的拷贝数，ER为液体样品中汞离子浓度：公式Ⅱ：ER＝nA/4816；其中，步骤(1)中等温PCR扩增的体系为：ddH₂O补足至20μL；等温PCR扩增的步骤包括：先将待测液体样品、汞离子生物传感器和ddH₂O接触混匀后在95℃下温浴4.5‑5.5min获得温浴后体系，将所述温浴后体系降温至25℃后加入Klenow大片段等温扩增酶、等温PCR缓冲液和dNTPs，混匀后在37℃温浴1.8‑2.2h获得含有等温PCR扩增产物的扩增后体系；微滴PCR扩增的体系为：ddH₂O补足至20μL；微滴PCR扩增反应的条件包括将所述微滴PCR扩增体系在50℃热激活300s，95℃预变性300s，95℃变性15s，60℃退火及延伸60s，共50个循环，最后在60℃下采集荧光信号；所述待测液体样品中汞离子浓度为40fmol～40pmol；所述汞离子生物传感器为T‑Hg‑T数量为5的生物传感器。