[发明专利]一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法有效
| 申请号： | 201910449314.2 | 申请日： | 2019-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN110157742B | 公开（公告）日： | 2022-09-30 |
| 发明（设计）人： | 孙明竹;刘曜玮;赵新;王雪锋;赵启立;崔茂盛 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N15/873 | 分类号： | C12N15/873 |
| 代理公司： | 天津耀达律师事务所 12223 | 代理人： | 侯力 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法。该方法的特点是引入的微流道用于存储细胞，引入了平行的双针分别用于细胞去核以及注核。该方法包括以下关键步骤：细胞的微流道存储，细胞的定位，细胞吸持，细胞去核，去核针与注核针的转换，细胞注核，最后释放已操作的细胞。实验结果表明该流程较传统体细胞核移植流程节约了41.7％的时间，并与手动体细胞核移植的存活率、成功率一致，有效的提升了体细胞核移植的效率与可重复性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 微流道 机器 人化 体细胞 移植 操作方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法，其特征在于该方法包括：第1步、细胞的微流道存储，该步骤将细胞放入微流道中；第2步、细胞的定位，在移动操作平台的过程中，自动化定位微流道中的待操作细胞；第3步、细胞吸持，计算出能够正好吸持住当前位置的细胞，而又不影响其他待操作和已操作细胞的最小压强，并对当前位置的细胞进行吸持；第4步、细胞去核，利用去核针进行去核；第5步、去核针与注核针的转换，将平行的去核针与注核针同时移动，使去核针移出显微视野，注核针移入显微视野；第6步、细胞注核，利用注核针进行细胞注核；第7步、释放已操作的细胞，进行下一个细胞操作。
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- 构建灵长类动物肝癌模型的方法，包括以下步骤：a)将特异性靶向miR122的gRNA序列插入到适宜的载体中，构建出体外转录miR122的模板载体；b)将cas9基因的序列插入到适宜的载体中，构建出体外转录cas9基因的模板载体；c)以步骤a)中的载体为模板进行PCR扩增，得到体外转录miR122的gRNA的模板；d)用限制性内切酶将步骤b)中的模板载体线性化，得到体外转录cas9基因的模板；e)以步骤c)和d)中的产物为模板进行体外转录，得到特异性靶向miR122的gRNA和cas9基因的mRNA；f)将步骤e)中的gRNA和mRNA注射到所述动物的受精卵细胞中，或者注射到卵母细胞中，再与所述动物的精子进行体外受精得到受精卵细胞；g)将步骤f)中的受精卵细胞移植入所述动物的子宫中，由此产生稳定的敲除miR122的动物子代。
- 一种无选择标记的多基因复合性状基因工程猪的制备方法-201510697023.7
- 唐中林;李奎;周荣;刘志国;李素霞;杨亚岚 - 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
- 2015-10-22 - 2015-12-30 - C12N15/873
- 本发明涉及转基因猪领域，特别涉及一种无选择标记的多基因复合性状基因工程猪的制备方法，包括以下步骤：以携带有无选择标记的sFat-1-2A-Fad-2基因片段的成纤维细胞作为供体，去核的成熟的猪卵母细胞作为受体，采用体细胞核移植的方法获得含有无选择标记的多基因复合性状基因的重构胚胎；进行体外培养后，移植到代孕的猪体内，猪分娩后，即得到无选择标记的多基因复合性状基因工程猪。该方法是将无选择标记的基因采取体细胞核移植的方法制备sFat1-2A-Fad2转基因猪，获得富含n-3不饱和脂肪的转基因猪，从而加快猪的肉质改良速度；并且转入的基因不带有选择标记基因，避免了选择标记基因带来的潜在危害。
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