[发明专利]一种分离培养肝脏原代细胞的方法在审
| 申请号： | 201811178787.5 | 申请日： | 2018-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN109161518A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 梁红霞;沈德良;余祖江;张红宇;张贤强;高晓娟;白黎;贾乔迪 | 申请（专利权）人： | 郑州大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 450052*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种分离培养肝脏原代细胞的方法，将离体的肝脏组织保存于预冷的组织贮藏液中，取出肝脏组织，并从肝脏组织的肝门静脉输入灌流液，灌流完毕后，将肝脏组织放入另一容器中，再注入胶原酶溶液，直至肝脏组织表面出现龟背状裂隙，然后将肝脏组织切块，并浸泡于所述胶原酶溶液中4‑8min，得到消化成熟的肝脏，用双蒸水清洗消化成熟的肝脏，过滤并收集肝细胞悬液，肝细胞悬液离心，收集细胞沉淀并用培养基重悬培养，得到分离后的肝脏原代细胞。本发明提供的分离培养肝脏原代细胞的方法，简化了传统原位两步灌流法的试剂配方，简化了试剂配制步骤，降低了成本，且所分离细胞的存活率、活力和纯度均有提高。 | ||
| 搜索关键词： | 肝脏组织 肝脏 原代细胞 分离培养 肝细胞悬液 胶原酶溶液 灌流 细胞培养技术 消化 分离细胞 肝门静脉 试剂配方 试剂配制 细胞沉淀 存活率 培养基 裂隙 灌流液 龟背状 双蒸水 贮藏液 放入 离体 切块 预冷 重悬 成熟 过滤 浸泡 清洗 取出 并用 保存 | ||
【主权项】：
1.一种分离培养肝脏原代细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将离体的肝脏组织保存于预冷的组织贮藏液中，备用；1L所述组织贮藏液按照以下方法配制：HEPES 2.4g、10000U青霉素、100mg链霉素、双蒸水定容至1L，pH7.2‑7.4；S2，取出肝脏组织，并从肝脏组织的肝门静脉输入灌流液，1L所述灌流液按照以下方法配制：氯化钠8‑9g、氯化钾0.2‑0.4g，双蒸水定容至1L；S3，灌流完毕后，将肝脏组织放入另一容器中，再注入胶原酶溶液，直至肝脏组织表面出现龟背状裂隙，然后将肝脏组织切块，并浸泡于所述胶原酶溶液中4‑8min，得到消化成熟的肝脏；S4，用双蒸水清洗消化成熟的肝脏，过滤并收集肝细胞悬液；S5，肝细胞悬液离心，收集细胞沉淀并用培养基重悬培养，得到分离后的肝脏原代细胞。
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- 本发明提供一种大鼠角膜内皮细胞的分离、纯化及培养的方法，属于细胞生物学领域；其包括以下步骤：(a)角膜组织样本分离，获得单个细胞；(b)制备特异性吸附角膜内皮细胞的免疫磁珠，从分离的单个细胞中纯化角膜内皮细胞；(c)优化的细胞培养液，培养大鼠角膜内皮细胞。本发明提供的大鼠角膜内皮细胞的分离方法，操作简单、细胞产量及成活率高；本发明提供的大鼠角膜内皮细胞纯化方法，操作简单、得率以及纯化率非常高；本发明提供的大鼠角膜内皮细胞培养方法，细胞增殖块、周期短以及经济效益高。
- 肾移植供体特异性尿源细胞及其DNA的制备方法以及其应用-201910558698.1
- 王长希;刘龙山;李希芮;韦勇成;苏晓均 - 中山大学附属第一医院
- 2019-06-26 - 2019-10-08 - C12N5/071
- 本发明涉及肾移植供体特异性尿源细胞及其DNA的制备方法以及其在肾移植供体基因组学背景分析中的应用。本发明尿源细胞的制备方法包括以下步骤：(1)取肾移植受体的中段尿，离心，弃上清；(2)向离心所得下层沉淀中加入含有青链霉素混合液或原代细胞抗生素的磷酸盐缓冲液进行重悬，然后再次离心，弃上清；(3)向离心所得下层沉淀中加入尿源细胞培养基，重悬，得到细胞悬液；(4)将所得细胞悬液接种于培养容器中，进行细胞体外扩增，得到肾移植供体特异性尿源细胞。本发明基于肾移植术后受体尿液获取的供体特异性尿源细胞，获得供体DNA，进行供体基因组学背景分析，其安全无创、成本低廉且分离效率高，易于获得足够数量的DNA。
- 一种用于全悬浮培养MDCK细胞的无血清培养基及其制备方法-201610486303.8
- 陈瑞爱;赖汉漳;谭文松;詹烜子;刘旭平;麦康聪;刘玉鹏;汤钦;盘伟岚;陈华坚;王小芬;陈培军;许冬蕾 - 肇庆大华农生物药品有限公司;华东理工大学;广东温氏大华农生物科技有限公司
- 2016-06-24 - 2019-10-08 - C12N5/071
- 本发明公开了一种用于全悬浮培养MDCK细胞的无血清培养基及其制备方法，所述用于全悬浮培养MDCK细胞的无血清培养基包括：基础代谢营养物、核苷酸、维生素、无机盐、剪切力保护剂、抗细胞结团剂、酸碱度缓冲剂、酸碱度指示剂、流感病毒增殖促进剂和其它添加物；所述用于全悬浮培养MDCK细胞的无血清培养基的制备方法，包括以下步骤：1)制备混合液：将原料溶解并混合；2)调节pH：调节混合液的pH至6.3～6.7，定容后得到用于全悬浮培养MDCK细胞的无血清培养基；该培养基支持MDCK单细胞高密度全悬浮培养，大大缩短了MDCK细胞由贴壁细胞驯化成无血清的全悬浮细胞驯化时间，适用于生物制品特别是兽用生物制品的大规模生产。
- 一种大黄鱼头肾巨噬细胞系的建立方法-201910432851.6
- 艾庆辉;崔坤;李庆飞;徐丹;麦康森 - 中国海洋大学
- 2019-05-23 - 2019-10-01 - C12N5/071
- 本发明公开了一种大黄鱼头肾巨噬细胞系的建立方法，选取高纯度的海水鱼大黄鱼原代头肾巨噬细胞，28℃条件下在含15％FBS的DMEM/F12中连续培养，利用培养基半数更换的换液方法，培养7d左右巨噬细胞开始增殖并在14d左右长满培养瓶，借助PBS‑EDTA辅助胰酶消化法进行巨噬细胞传代，成功建立了一种巨噬细胞系。本发明的有益效果是提供了一种简单有效的海水鱼大黄鱼头肾巨噬细胞系的建立方法。
- 专利分类
