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[发明专利]外源性人端粒酶反转录酶基因重组慢病毒颗粒的获得方法-CN201910735113.9在审
发明人：秦晓东;何祥一;曾飒;张志东 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-08-09 - 公布日： 2019-11-26 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了外源性人端粒酶反转录酶基因重组慢病毒颗粒的获得方法，具体涉及生物技术领域，包括以下步骤：S1、准备材料和试剂；S2、构建pLVX‑puro‑hTERT重组慢病毒载体；S3、表达hTERT基因重组慢病毒颗粒的获得。本发明通过携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，慢病毒载体能够将目的基因高效整合于宿主基因组，从而实现外源基因长期、稳定的表达，整个慢病毒颗粒获取操作方便，获取的慢病毒颗粒对于后期的感染细胞，使正常体细胞永生化得到保证，可获得稳定增殖的永生化细胞系，并且侵染效率高，稳定性较好。
重组慢病毒颗粒慢病毒颗粒慢病毒载体外源基因永生化人端粒酶反转录酶基因慢病毒包装质粒重组慢病毒载体生物技术领域宿主基因组正常体细胞病毒包装病毒颗粒感染细胞高效整合目的基因外源性增殖的构建侵染携带保证

[发明专利]一种口腔黏膜上皮细胞的分离和培养方法-CN201910735940.8在审
发明人：秦晓东;何祥一;曾飒;张志东 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-08-09 - 公布日： 2019-10-11 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种口腔黏膜上皮细胞的分离和培养方法，具体涉及细胞培养技术领域，具体分离和培养步骤如下：无菌条件下取唇裂整复术中切除的多余口腔黏膜组织，用PBS反复冲洗，用眼科剪除去黏膜下组织，剪成小块，置于DispaseⅡ酶中，4℃过夜消化18h，用眼科镊分离上皮层，PBS液冲洗上皮层，将上皮剪切成小片加入混合消化液中，37℃消化7分钟，加胎牛血清终止消化，用吸管反复吹打至单细胞悬液，离心弃上清，加入无血清培养基，接种于培养瓶中倒置培养，当原代培养的细胞汇合率达70％‑80％时，用0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA消化并以1:2传代。本发明整个培养过程简单，得到的原代培养细胞成活率高，并且不易出现双核、多核、畸形核细胞。
消化口腔黏膜上皮细胞上皮层胰蛋白酶传代唇裂吸管口腔黏膜组织无血清培养基细胞培养技术原代培养细胞单细胞悬液倒置培养胎牛血清无菌条件细胞汇合原代培养剪切吹打核细胞培养瓶消化液眼科剪眼科镊多核双核小块成活率冲洗接种切除畸形

[发明专利]一种人正常PDLCs的分离和培养的方法-CN201910534620.6在审
发明人：秦晓东;何祥一;曾飒;张志东 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-06-20 - 公布日： 2019-09-17 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种人正常PDLCs的分离和培养的方法，具体涉及细胞培养技术领域，包括以下步骤：步骤一，取第一前磨牙放置于烧杯容器内，向烧杯容器内倒入pH值在7.2‑7.4的PBS缓冲液对第一前磨牙进行冲洗，然后重复冲洗五次，去除第一前磨牙表面的污垢和杂质；步骤二，将冲洗后的第一前磨牙放在无菌环境下进行晾干后，刮取第一前磨牙根部外壁上的1/3牙周膜，添加至容器内。本发明通过对人体牙周膜细胞进行提取，并对提取后的细胞进行多次PBS冲洗，细胞经过PBS清洗会去除细胞中的杂质，能够保持细胞能在适合的PH值范围之内，并对牙周膜细胞进行消化离心，使得分离后的牙周膜细胞便于进行培养，提高了牙周膜细胞在培养过程中的成活率。
磨牙牙周膜细胞细胞冲洗烧杯去除细胞培养技术无菌环境晾干膜细胞人体牙污垢刮取外壁成活率消化重复

[发明专利]一种腺病毒颗粒获得方法-CN201910534638.6在审
发明人：秦晓东;何祥一;曾飒;张志东 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-06-20 - 公布日： 2019-09-13 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明公开了一种腺病毒颗粒获得方法，具体涉及腺病毒获取领域，具体操作步骤如下：S1、pshuttle‑cmv‑hTERT穿梭质粒的构建；S2、BJ5183/p超级感受态的制备；S3、同源重组腺病毒质粒构建；S4、腺病毒颗粒收集。本发明通过pshuttle‑cmv‑hTERT穿梭质粒的构建、BJ5183/p超级感受态的制备、同源重组腺病毒质粒构建以及腺病毒颗粒收集共四个步骤，能够稳定的获取腺病毒，且每次获取的腺病毒颗粒数都能够保持稳定，相比于现有技术中腺病毒的获取，获取效率以及稳定性都得到了很大的提高。
腺病毒颗粒构建腺病毒腺病毒质粒穿梭质粒同源重组感受态制备

[发明专利]一种Rochel反转录试剂及其制备方法-CN201910534645.6在审
发明人：张志东;秦晓东;何祥一;曾飒 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-06-20 - 公布日： 2019-09-13 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种Rochel反转录试剂及其制备方法，具体涉及细胞生物科技领域，包括去离子水、EASY Dilution for Real Time PCR、gDNA Eraser、5x gDNA Eraser Buffer、RNase抑制剂和基因引物，所述基因引物包括端粒酶反转录酶、酸甘油醛脱氢酶、碱性磷酸酶、核心结合因子、骨涎蛋白、骨钙素、骨桥素和Ⅰ型胶原蛋白。本发明通过设有多种组合基因引物，便于骨质细胞繁殖，应用过程中反转录速度快，且成活率高，生长率好，有利于牙周膜再生治疗研究，生产过程中无菌处理，并采用低温储存，反转录试剂质量好，储备时间长，能够满足DNA生物合成需要。
反转录试剂基因引物制备端粒酶反转录酶甘油醛脱氢酶碱性磷酸酶低温储存骨涎蛋白骨质细胞胶原蛋白科技领域去离子水生产过程生物合成无菌处理细胞生物应用过程组合基因反转录骨钙素骨桥素引物成活率繁殖再生储备治疗研究

[发明专利]一种具有良好物理及抑菌性能的茶多酚根管封闭剂-CN201510489626.8有效
发明人：张学琛;张湉;王俊杰;贾美娥;何祥一 -专利权人： 何祥一;张学琛
申请日： 2015-08-11 - 公布日： 2018-08-21 - 主分类号： A61K6/02 文献下载
摘要：本发明公开了茶多酚根管封闭剂，属于口腔材料技术领域。本发明的茶多酚根管封闭剂是在氧化锌丁香油封闭剂中加入茶多酚，使茶多酚、氧化锌及丁香油的功效产生协同，明显增强了其抑菌性能，同时有效减弱了氧化锌丁香油的毒性，是一种具有良好物理及抑菌性能茶多酚根管封闭剂。抑菌实验显示，本发明制备的茶多酚根管封闭剂对指示菌具有良好的抑制作用；物理实验显示，茶多酚根管封闭剂的物理性能符合封闭剂的性能标准；临床试验显示，茶多酚根管封闭剂在根管治疗后，能有效的减少疼痛等急症的发生率，同时能提高根管治疗长期的成功率。因此，有望成为一种新型的根管封闭材料运用于临床。
一种具有良好物理性能茶多酚根管封闭剂

[发明专利]重组人源性抗菌肽C16LL-37及其对变异链球菌生物活性作用的应用方法-CN201610196500.6在审
发明人：周建业;李志强;何祥一;车春晓;姜科宇;张菊梅;焦康礼;胡晓潘;张轩 -专利权人：西北民族大学
申请日： 2016-03-31 - 公布日： 2016-10-12 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，是一种重组人源性抗菌肽C16LL‑37及其对变异链球菌生物活性作用的应用方法，对重组抗菌肽C16LL‑37的抗菌活性、靶向性、溶血性等各项生物活性分析应用。采用标准固相合成技术合成，将人源性抗菌肽LL‑37的氨基酸序列与变异链球菌CSP的C端16个氨基酸序列CSPC16通过连接体‑GGG‑连接，合成特异性靶向能力的重组人源性抗菌肽C16LL‑37。综上所述，人源性特异性靶向抗菌肽C16LL‑37的研发不仅解决了天然抗菌肽抗菌谱广、易产生耐药性、生物效能低、筛选难度高等问题，而且克服了化学合成抗菌肽化学结合效率低、融合性蛋白不稳定等缺点。此外，C16LL‑37的AMP区域来源于人体，较高的生物安全性为其今后在临床的广泛应用奠定了坚实基础。
重组人源性抗菌 c16ll 37 及其变异链球菌生物活性作用应用方法

[发明专利]一种检测念珠菌的基因芯片-CN200710306986.5有效
发明人：车团结;徐进章;何祥一 -专利权人：兰州百源基因技术有限公司
申请日： 2007-12-29 - 公布日： 2009-01-21 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供一种检测念珠菌的基因芯片，涉及生物领域。由于真菌感染诊断存在困难，方法相对落后，往往滞后与临床治疗，导致很多患者得不到正确和及时的诊断而丧失了治疗机会。本发明一种检测念珠菌的基因芯片，其特征在于该芯片包括(1)多种不同类型念珠菌的检测寡核苷酸探针和质量控制寡核苷酸探针；(2)寡核苷酸探针通过手臂分子固化在载体材料上形成的探针阵列。具有快速、准确侦检念珠菌感染性疾病，且灵敏性高、特异性高的有益效果。
一种检测念珠菌基因芯片

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