[发明专利]一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建及应用在审
| 申请号： | 201811027547.5 | 申请日： | 2018-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109161559A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 李永泉;毛旭明;卜庆廷;俞品 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/76 | 分类号： | C12N15/76;C12N15/66 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 赵杭丽 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建及应用，本发明的链霉菌基因组精简系统是在全基因组比对分析大片段冗余基因区的基础上，组合了同源重组系统和高效的位点特异性重组系统(Cre/loxP系统)进行靶向大片段缺失。同源重组系统中采用了基于自杀载体的同源重组策略，大大提高了敲除的靶向性和效率，用于一次性缺失约700Kb的冗余基因区时效率高达100％。本发明方法操作简单、高效、靶向性强、正确率高。本发明为构建链霉菌底盘细胞奠定了理论基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建，为药物产业化和新药研发提供强大支撑。 | ||
| 搜索关键词： | 链霉菌 构建 基因组 同源重组系统 冗余基因 靶向性 底盘 位点特异性重组系统 大片段缺失 合成生物学 细胞 比对分析 理论基础 全基因组 同源重组 新药研发 自杀载体 产业化 一次性 正确率 靶向 敲除 区时 应用 大片 支撑 | ||
【主权项】：
1.一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建，其特征在于，通过全基因组比对技术分析、定位链霉菌基因组中的大片段冗余基因区，构建链霉菌敲除质粒pKClox6、链霉菌自杀质粒pSETlox71及链霉菌表达质粒pNitCre，其中，敲除质粒pKClox66携带lox66位点，链霉菌温度敏感型复制子pSG5，Apra抗性；自杀质粒pSETlox71携带lox71位点，无链霉菌复制子，Spect抗性；表达质粒pNitCre携带链霉菌密码子优化的Cre重组酶，链霉菌游离型复制子pIJ101，Apra抗性。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811027547.5/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 适用于链霉菌的T7RNA聚合酶表达盒PhT7及其表达载体和应用-201611117332.3
- 韦俊宏;周泽扬;田金金 - 西南大学
- 2016-12-07 - 2019-10-22 - C12N15/76
- 本发明涉及一种适用于链霉菌的T7 RNA聚合酶表达盒PhT7及其表达载体和应用，适用于链霉菌的T7 RNA聚合酶表达盒PhT7核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，该序列根据链霉菌的密码子偏好优化设计，因此能够在链霉菌中高效表达，可用于提高链霉菌次级代谢产物的产量，缩短发酵时间。
- 敲除中心碳代谢基因以提高格尔登素发酵水平的方法-201610621774.5
- 白林泉;王欣然 - 上海交通大学
- 2016-08-01 - 2019-07-12 - C12N15/76
- 一种敲除中心碳代谢基因以提高格尔登素发酵水平的方法，是通过失活吸水链霉菌XM201基因组中编码pyk的ORF3547，以及编码sdh的ORF1011、ORF6607和ORF4917，导致中心碳代谢流量重排及相关前体积累，使格尔登素的发酵产量得以提高。本发明通过改变中心碳代谢的代谢流分配，提高了格尔登素前体的供应，以此来提高格尔登素发酵水平，最终格尔登素发酵产量最高提高了一倍，最终产量达到1.3g/L，通过本发明可显著提高格尔登素的发酵产量，同时使发酵成本大幅降低。
- 敲除自溶链霉菌野生型菌株的almRIII基因、发酵提高洋橄榄叶素及衍生物产量的方法-201610836891.3
- 鲁涛;文孟良;蒋明星 - 云南大学
- 2016-09-20 - 2019-05-28 - C12N15/76
- 敲除自溶链霉菌野生型菌株的almRIII基因、发酵提高洋橄榄叶素及衍生物产量的方法，属于微生物突变的基因工程及发酵方法。本发明通过敲除自溶链霉菌(Streptomyces autolyticus)△almRIII基因以获得突变株，该自溶链霉菌(Streptomyces autolyticus)保藏编号为CCTCC NO：M 2015580。进一步，采用Red/ET一步PCR法构建了almRIII基因的插入突变，并通过同源重组获得其敲除突变株；并将所构建的敲除突变株进行发酵提高洋橄榄叶素及其衍生物的产量，以及HPLC检测和质谱及1H、13C核磁共振分析发酵产物等。本发明可大幅提高合成洋橄榄叶素及其衍生物的产量。
- 提高格尔登素发酵水平的方法-201610621794.2
- 白林泉;王欣然 - 上海交通大学
- 2016-08-01 - 2019-05-07 - C12N15/76
- 一种提高格尔登素发酵水平的方法，是通过将吸水链霉菌XM201基因组中编码格尔登素I型聚酮合酶的上游启动子PgdmA序列通过原位置换换成XM201基因组内源的高效启动子P5061，使得格尔登素聚酮链的合成效率提高，并使格尔登素在发酵中的产量得以提高。采用本发明的方法，通过将格尔登素聚酮合酶的启动子置换成胞内高效的启动子，提高了聚酮合酶合成聚酮链的效率，使格尔登素产量有了较大的提高。通过本发明可提高格尔登素的发酵产量，同时使发酵成本降低。本发明所得到工程菌株格尔登素的发酵终产量提高了43％，实验室摇瓶水平达到868mg/L。
- 一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建及应用-201811027547.5
- 李永泉;毛旭明;卜庆廷;俞品 - 浙江大学
- 2018-09-04 - 2019-01-08 - C12N15/76
- 本发明提供一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建及应用，本发明的链霉菌基因组精简系统是在全基因组比对分析大片段冗余基因区的基础上，组合了同源重组系统和高效的位点特异性重组系统(Cre/loxP系统)进行靶向大片段缺失。同源重组系统中采用了基于自杀载体的同源重组策略，大大提高了敲除的靶向性和效率，用于一次性缺失约700Kb的冗余基因区时效率高达100％。本发明方法操作简单、高效、靶向性强、正确率高。本发明为构建链霉菌底盘细胞奠定了理论基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建，为药物产业化和新药研发提供强大支撑。
- 一种链霉菌药物高效生物合成的构建方法-201510340415.8
- 李永泉;刘水平;卜庆廷;江辉 - 浙江大学
- 2015-06-18 - 2019-01-01 - C12N15/76
- 本发明提供一种链霉菌药物高效生物合成的构建方法。首先，基于诱导型启动子OROlac和强启动子ermEp*，首次在链霉菌中构建了梯度诱导表达体系。其次，通过梯度诱导控制靶基因表达量，偶联分析靶基因表达量与目标药物产量的关系，从而揭示药物生物合成途径中的限速反应及其限速酶的适配性。最后，通过组成型启动子ermEp*，理性串联高表达相关限速酶编码基因，获得了一株恰塔努加链霉菌高产菌株L12，送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：CGMCC No.10157。摇瓶发酵结果显示L12中纳他霉素产量是恰塔努加链霉菌L10的3.3倍。50L发酵罐小试中，最高产量达到15.7 g/L。本发明方法高效、准确、操作简单，且普遍适用于其它链霉菌。
- 一种恩拉霉素产生菌株的构建方法及相关基因-201510458924.0
- 张会图;王应东;路福平;刘东田;魏建军 - 天津科技大学;天津市新星兽药厂
- 2015-07-30 - 2018-10-26 - C12N15/76
- 本发明涉及一种恩拉霉素高产菌株的构建方法及相关基因和菌株；相关基因序列如序列1所示，同时提供含有如权利要求所述的恩拉霉素产量高且链霉素抗性好的基因工程菌株P1。本发明首先针对目前工业生产用恩拉霉素产生菌P建立并优化了出一套简便易行的遗传转化体系，并首次利用定点突变技术对该菌株中的核糖体蛋白(S12)编码基因rpsl进行了定点改造，同时对改造后菌株的产素水平及生理生化特性进行了研究。结果显示：工程菌Streptomyces fungicidicus P1的恩拉霉素产量与原始菌株相比提高了约20﹪，同时该菌株对链霉素的抗性提高了至少10倍。
- 一种链霉菌生物合成基因簇负调控因子的遗传筛选方法-201810443289.2
- 李永泉;毛旭明;罗帅 - 浙江大学
- 2018-05-10 - 2018-10-02 - C12N15/76
- 本发明提供一种链霉菌新的生物合成基因簇负调控因子的筛选方法，在链霉菌细胞内构建一个以自身目的基因的启动子介导的报告系统，再使用基于转座子Himar1构建的随机突变体系对带报告系统的链霉菌作随机突变，将突变后的链霉菌菌株进行强化筛选，得到目的基因高表达的链霉菌菌株，对目的基因高表达的链霉菌菌株的基因组进行噬菌体包装并筛选出带有随机插入片段的黏粒，对黏粒的DNA测序确定目的基因高表达的链霉菌菌株基因组中随机插入片段插入的位置。本发明筛选环境稳定，筛选通量高，假阳性低，高效、准确，操作方便。可广泛用于工业用链霉菌代谢产物高产筛选改造领域，筛选改造的链霉菌代谢产物产量高，遗传稳定性好，适于工业化生产。
- 提高林可霉素A组份和减少林可霉素B组份的重组工程菌及应用-201510400668.X
- 赵广荣;逄爱萍 - 天津大学
- 2015-07-09 - 2018-09-28 - C12N15/76
- 本发明公开了提高林可霉素A组份和减少林可霉素B组份的重组工程菌及应用,重组工程菌用下述方法构建：(1)以林可链霉菌基因组为模板，以SEQ ID No.1所示序列为上游引物，以SEQ ID No.2所示序列为下游引物，克隆lmbW基因；(2)将lmbW基因以酶切连接的方式，连接到pUWL201apr载体上，构建pAP04载体；(3)将pAP04载体转化到林可链霉菌，筛选，获得提高林可霉素A组份和减少林可霉素B组份的重组工程菌。本发明重组菌不仅使林可霉素A组份发酵效价高，而且林可霉素B组份下降。有利于简化下游分离纯化过程，降低生产成本、节能、减排，提高经济效益。
- 抑制植物病原真菌的重组利迪链霉菌的构建方法与应用-201510507532.9
- 吴慧玲;刘伟成;李锦锦;刘霆;董丹;张涛涛;卢彩鸽;刘德文;张殿朋 - 北京市农林科学院
- 2015-08-18 - 2018-09-25 - C12N15/76
- 本发明公开了抑制植物病原真菌的重组利迪链霉菌的构建方法与应用。本发明所提供的构建重组利迪链霉菌的方法，包括将蛋白质的编码基因导入作为宿主菌的利迪链霉菌中，得到重组利迪链霉菌的步骤；所述蛋白质为a)或b)：a)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.1的蛋白质；b)将序列表中SEQ ID No.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。实验证明，本发明的利迪链霉菌(Streptomyces lydicus)AB01CGMCC No.10707和RFRP可以用来抑制植物病原真菌和制备植物病原真菌抑制剂。
- 利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法-201810084261.4
- 闻建平;马东旭;崔佳琦 - 天津大学
- 2018-01-29 - 2018-06-22 - C12N15/76
- 本发明涉及利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法。本发明通过基因工程手段，首次向筑波链霉菌(Streptomyces tsukubaensis NRRL 18488)基因组中插入正调控基因tsuZ及其靶基因tsuS2，来增加基因工程菌中正调控基因tsuZ及其靶基因tsuS2表达量，以达到提升基因工程菌发酵产FK506能力之目的。通过上述策略构建出的基因工程菌发酵FK506产量为324mg/L，较出发菌株‑S.tsukubaensis NRRL18488产量提高了36％。因此，本发明对于提升菌株发酵FK506产量具有很大的应用潜力。同时，也为利用基因工程手段改造菌株发酵高产FK506提供新的方法。
- 一种恩拉霉素高产菌株选育方法-201710961430.3
- 路福平;张会图;宋淑婷 - 天津科技大学
- 2017-10-17 - 2018-01-26 - C12N15/76
- 本发明涉及一种恩拉霉素高产菌株筛选方法，具体步骤如下确定恩拉霉素生物合成过程中的限速酶编码基因短板基因；构建硫链丝菌素抗性基因整合型载体；对改造后的菌株进行诱变处理，并从中筛选硫链丝菌素高抗性菌株；对筛选到的高抗菌株进行遗传操作，并将tsr开放阅读框恢复为原来的endX基因；所得菌株既为恩拉霉素高产突变菌株。本方法结合了传统的诱变育种技术以及现代分子生物学方法的优势，实现了恩拉霉素高产菌株的快速高效筛选，该方法也适用于其它抗生素高产菌株的筛选。
- 色霉素A2、A3的生物合成及提纯工艺-201610874875.3
- 占纪勋;于大禹 - 杭州唯铂莱生物科技有限公司
- 2016-10-08 - 2017-11-07 - C12N15/76
- 本发明公开了一种色霉素A2、A3的生物合成及提取纯化工艺，包括下述步骤1）SrcmRI基因过表达工程菌SR1的构建；2）SrcmRII基因敲除工程菌SR2的构建；3）SrcmRI基因过表达和SrcmRII基因敲除工程菌SR3的构建；4）将步骤1）‑3）构建的工程菌在液体培养基中的发酵及产物萃取获得色霉素提取液；5）将步骤1）‑3）构建的工程菌在固体培养基上的培养及产物萃取获得色霉素提取液；6）将步骤4）或步骤5）中的色霉素提取液进行纯化和分析获得最终产物色霉素A2和色霉素A3。本发明通过基因工程菌的构建形成；产量高，副产物少，产物提纯工艺简单；操作过程易控制，无污染，生产成本低。
- 阿维链霉菌rex基因在提高阿维菌素产量中的应用-201510313874.7
- 陈芝;刘兴超;文莹;宋渊;李季伦 - 中国农业大学
- 2015-06-09 - 2017-09-29 - C12N15/76
- 本发明提供了一种提高阿维菌素产量的方法及生产菌株，其是将阿维链霉菌中编码细胞内氧化还原调控因子(redox‑sensing transcriptional repressor)的rex基因通过基因缺失载体引入阿维链霉菌中，获得缺失rex基因的重组菌，使其不再合成Rex蛋白，从而提高阿维菌素的产量，使得阿维链霉菌对于限氧条件更加耐受。本发明的基因工程菌可直接用于阿维菌素的发酵生产，提高阿维菌素的发酵单位，降低生产成本。
- 一种产5‑酮基米尔贝霉素的链霉菌及生产5‑酮基米尔贝霉素的方法-201310541829.8
- 黄隽;徐赛珍;周敏 - 浙江海正药业股份有限公司
- 2013-11-04 - 2017-08-04 - C12N15/76
- 本发明涉及基因重组技术领域，尤其涉及一种产5‑酮基米尔贝霉素的链霉菌及生产5‑酮基米尔贝霉素的方法。本发明提供了一种用于敲除链霉菌milF基因的重组载体，包括milF基因同源片段，该片段的序列为在如SEQ ID NO2所示核苷酸序列中第158～924位核苷酸间缺失105～767个核苷酸。并提供了该重组载体的构建方法，以及采用该重组载体敲除链霉菌中milF基因的方法，及milF基因被敲除的链霉菌。该链霉菌可以直接发酵产生5‑酮基米尔贝霉素，简化了米尔贝肟的合成工艺，并避免了传统的化学合成方法带来的污染。
- 链霉菌重组质粒pIJ8600‑attM及其构建方法和其应用-201610697539.6
- 林岚 - 东南大学
- 2016-08-19 - 2017-04-26 - C12N15/76
- 本发明公开了一种链霉菌重组质粒pIJ8600‑attM及其构建方法和其应用，该重组质粒是基于大肠杆菌‑链霉菌穿梭质粒pIJ8600，采用限制性酶切以及DNA连接原理，插入了功能性的解酯酶基因attM片段构建而成。该质粒用于链霉菌群体感应分子γ‑丁内酯的降解,因此可应用于基于群感淬灭的动植物放线菌病原体的防治、同时用于空气、水体等环境中抑制某些放线菌所产次生代谢物或者生物膜。该质粒降解丁内酯的后续用途是基于链霉菌同源重组的基因表达，相较于其它物理、化学方法，成本低廉，无残留，环境友好。
- 一种链霉菌基因组DNA大片段体内随机敲除的方法-201410351442.0
- 路志群;邢述永;李文雪;邓自发 - 南通大学
- 2014-07-23 - 2017-03-01 - C12N15/76
- 本发明公开了一种链霉菌基因组DNA大片段体内随机敲除的方法，包括1）构建系列重组质粒pTNL_101、pTNL_103、pTNL_104、pTNL_105为第一个sceS酶切位点随机导入质粒；2）将所构建的重组质粒pTNL_101、pTNL_103、pTNL_104、pTNL_105导入天蓝色链霉菌M145，构建随机染色体大片段缺失的突变子库1；3）构建系列重组质粒pTNL_102为第二个sceS酶切位点随机导入质粒，导入突变子库1，获得突变子库2；4）R2YE平板筛选出大片段敲除突变子，精细定位染色体删除区段，并在出发菌株中进行定位敲除予以验证。本发明可以有效随机去除染色体区域可以去除的部分，目前定位结果表明敲除片段长度在2kb‑100kb之间，为改造链霉菌为抗生素异源表达宿主和底盘生物提供依据。
- 调控基因对核苷类抗生素生物合成的调节作用-201310036805.7
- 洪斌;王丽非;李青连;谢云英;陈汝贤 - 中国医学科学院医药生物技术研究所
- 2013-01-31 - 2017-02-08 - C12N15/76
- 本发明涉及调控基因对核苷类抗生素生物合成的调节作用，具体是指链霉菌Streptomyces sp.SS(CGMCC No.1764)中尿苷肽类抗生素sansanmycin生物合成基因簇中的生物合成调节基因ssaA的调控功能和调控模式。本发明还涉及提高sansanmycin生产菌株生产sansanmycin的产量的方法，其中包括通过ssaA基因过表达提高sansanmycin生产菌株的产量，以及利用ssaA调控模式来提高sansanmycin产量的方法，其中包括通过在培养过程中移除终产物以解除其对ssaA功能的抑制等。
- 匹马霉素A菌株的基因工程改造方法-201610579908.1
- 白林泉;齐震 - 上海交通大学
- 2016-07-21 - 2016-12-07 - C12N15/76
- 一种匹马霉素A菌株的基因工程改造方法，是通过在菌株Streptomyces chattanoogensis QZ12中过表达后修饰基因pimD与pimF，实现了匹马霉素A产量的大幅度提高，并降低了匹马霉素B的产生。本发明利用代谢工程方法构建了一株高效低毒匹马霉素A的高产菌株，该菌株在使匹马霉素B产量降低86％的基础上，将高效低毒匹马霉素A的产量提高了107％，实验室摇瓶发酵水平达到746mg/L，为匹马霉素A的工业化生产奠定了基础。
- 一种维吉尼亚链霉菌IBL14中的CRISPR-Cas系统及应用其进行基因编辑的方法-201511002817.3
- 童望宇;雍德祥;李雪 - 安徽大学
- 2015-12-25 - 2016-05-04 - C12N15/76
- 本发明公开了一种维吉尼亚链霉菌IBL14中的CRISPR-Cas系统及基因编辑操作方法，包括它的CRISPR-Cas I-B型基因编辑系统特征、靶向基因与基因编辑模版的设计与质粒构建及靶向基因与基因编辑模版重组质粒在链霉菌中的基因编辑操作全过程。应用维吉尼亚链霉菌IBL14中的CRISPR-Cas I-B型基因编辑系统对遗传基因进行敲除、插入、无痕点突变及RNA水平调控可方便地改变生物体的遗传特征，该发明为实现提高医药、食品及其它工业产品的生产水平和改善产品品质提供了新的技术和方法。
- 一种构建基因工程盐霉素高产菌株的方法-201510903801.3
- 李永泉;管文军;李涵;朱振洪 - 浙江大学
- 2015-12-09 - 2016-03-23 - C12N15/76
- 本发明提供了一种利用分子生物学手段改造白色链霉菌，获得盐霉素高产菌株的方法。首先利用启动子重构技术，将盐霉素合成基因簇中的正效调控基因slnR和转运蛋白基因slnT与ermEp*高效启动子连接，利用位点特异整合技术，将其整合插入白色链霉菌ZD11的基因组，定向优化盐霉素合成通路中的元件，获得稳定、高效合成盐霉素的高产菌株。采用本发明的方法，可以使盐霉素的发酵中产量提高60％，摇瓶产量达到16g/L。
- 一种海洋放线菌基因遗传操作系统的构建方法-201510663567.1
- 马艳玲;陈婉容;刑福炜;李锐 - 佛山科学技术学院
- 2015-10-15 - 2016-01-20 - C12N15/76
- 本发明公开一种海洋放线菌基因遗传操作系统的构建方法，其包括步骤：将已灭菌的SFMS培养基融化，温度降至40~50℃，在SFMS培养基中加入适量的抗生素，倒平板，将Salinispora arenlocola CNS-205孢子悬液涂布平板，25~30℃培养4~5d；将整合型质粒通过CaCl2法导入接合转移供体菌中，借助于供体菌上tra基因，所述整合型质粒以接合转移方式从供体菌导入到步骤A得到的Salinispora arenlocola CNS-205孢子中进行整合。通过上述技术方案，实现了向Salinispora arenlocola CNS-205导入外源DNA片段的可能性。
- 一种链霉菌重组表达载体的构建及应用-201510234719.6
- 周哲敏;关成冉;崔文璟;周丽 - 江南大学
- 2015-05-08 - 2015-08-05 - C12N15/76
- 本发明公开了一种链霉菌重组表达载体的构建及应用，属于基因工程领域。本发明提供的链霉菌表达载体，方便外源基因的插入及防止转录通读在载体上添加多克隆位点和终止子，且能够在三种链霉菌中大量分泌表达TGase。
- 一种四环素耐低氧菌种的构建方法-201410748432.0
- 张燕玉;马学霞;李学兵;孙瑞君;崔莉 - 宁夏启元药业有限公司
- 2014-12-09 - 2015-06-24 - C12N15/76
- 本发明涉及一种四环素耐低氧菌种的构建方法，其工艺包括：构建可表达透明颤菌血红蛋白基因的质粒pSET152；将上述构建的质粒pSET152转化入大肠杆菌PUZ8002中；将转化后的大肠杆菌PUZ8002与金色链霉菌进行接合转移，得到四环素耐低氧菌种。通过本发明方法构建的四环素耐低氧菌种可以改善重组四环素在低氧条件下的蛋白表达水平，最终达到节约能源，降低成本的目的。
- 构建产纤维素酶和纳他霉素的重组利迪链霉菌的方法-201410815297.7
- 吴慧玲;刘伟成;李锦锦;刘霆;董丹;张涛涛;卢彩鸽;张殿朋;刘德文;田兆丰 - 北京市农林科学院
- 2014-12-24 - 2015-04-01 - C12N15/76
- 本发明公开了构建产纤维素酶和纳他霉素的重组利迪链霉菌的方法。本发明所提供的构建产纤维素酶和纳他霉素的重组利迪链霉菌的方法中，构建产纤维素酶和纳他霉素的重组利迪链霉菌的方法，包括将血红蛋白的编码基因和纤维素酶的编码基因导入作为宿主菌的利迪链霉菌中筛选得到产纤维素酶和纳他霉素的重组利迪链霉菌的步骤；血红蛋白为A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.3的蛋白质，或A2)具有血红蛋白功能的由A1)衍生的蛋白质；纤维素酶为B1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.4的蛋白质，或B2)具有纤维素酶功能的由B1)衍生的蛋白质。
- 高效生防重组利迪链霉菌及其构建方法与应用-201410787505.7
- 吴慧玲;刘伟成;李锦锦;田兆丰;董丹;刘霆;张涛涛;卢彩鸽;张殿朋;刘德文 - 北京市农林科学院
- 2014-12-17 - 2015-04-01 - C12N15/76
- 本发明公开了高效生防重组利迪链霉菌及其构建方法与应用。本发明所提供的高效生防重组利迪链霉菌及其构建方法与应用中，构建重组利迪链霉菌的方法，包括将血红蛋白的编码基因和纳他霉素生物合成正调控因子的编码基因导入作为宿主菌的利迪链霉菌中筛选得到重组利迪链霉菌的步骤；血红蛋白是A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.3的蛋白质，或A2)具有血红蛋白功能的由A1)衍生的蛋白质：纳他霉素生物合成正调控因子为B1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.4的蛋白质，或B2)具有纳他霉素生物合成正调控因子功能的由B1)衍生的蛋白质。
- 产纤维素酶和产纳他霉素的重组利迪链霉菌与应用-201410815257.2
- 吴慧玲;刘伟成;李锦锦;刘霆;董丹;张涛涛;卢彩鸽;张殿朋;刘德文;田兆丰 - 北京市农林科学院
- 2014-12-24 - 2015-04-01 - C12N15/76
- 本发明公开了产纤维素酶和产纳他霉素的重组利迪链霉菌与应用。本发明所提供的重组利迪链霉菌的构建方法，包括将血红蛋白的编码基因和纤维素酶的编码基因的表达载体导入利迪链霉菌中，得到产纤维素酶和纳他霉素的重组利迪链霉菌的步骤；血红蛋白为A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.3的蛋白质，或A2)具有血红蛋白功能的由A1)衍生的蛋白质；纤维素酶为B1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.4的蛋白质，或B2)具有纤维素酶功能的由B1)衍生的蛋白质；所述表达载体从上游至下游的方向含有红霉素抗性基因启动子、所述纤维素酶的编码基因、所述红霉素抗性基因启动子、所述血红蛋白的编码基因。
- 大肠杆菌-链霉菌穿梭型BAC载体及其构建方法-201310083678.6
- 刘刚;戴素琴;陈惠鹏;邢玉华;张部昌 - 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
- 2013-03-15 - 2014-09-17 - C12N15/76
- 本发明涉及一种大肠杆菌-链霉菌穿梭型BAC载体及其构建方法，该BAC载体含有多克隆位点MCS，Am抗性基因，整合酶基因int，整合位点attp，接合转移片段oriT，BAC载体的复制区oriS、repA基因、sopA基因、sopB基因、sopC序列、cos位点和loxP位点。本发明从pBeloBAC11出发，用Red同源重组技术将其上的氯霉素抗性基因替换为用于接合转移（oriT）、定点整合（attp-int）和抗性筛选（Am）的oriT-attp-int-Am的DNA片段（称之为替换盒），得到载体pBTIBAC1，为实现大片段基因簇在链霉菌中的异源表达奠定了基础。
- 基于代谢调控高产土霉素的方法-201210550528.7
- 郭美锦;张嗣良;于岚;王龙;颜湘云;储炬;庄英萍;肖慈英 - 华东理工大学
- 2012-12-18 - 2014-06-18 - C12N15/76
- 本发明涉及基于代谢调控高产土霉素的方法。本发明公开了一种在龟裂链霉菌中通过调控土霉素合成途径提高土霉素产量的方法，通过增加一个或多个土霉素生物合成途径的调控因子的拷贝数，从而提高土霉素合成途径中相关基因的表达水平，进而提高土霉素的产量。
- 利用vgb基因构建的抗贫氧高密度发酵纳他霉素基因工程菌株及其应用-201310234364.1
- 刘飞;王绍花;朱希强;凌沛学 - 山东省生物药物研究院
- 2013-06-14 - 2014-02-05 - C12N15/76
- 利用vgb基因构建的抗贫氧高密度发酵纳他霉素基因工程菌株及其应用。本发明提供一种利用vgb基因构建的抗贫氧高密度发酵纳他霉素的基因工程菌株(Streptomyces gilvosporeus sw-807，CGMCC No.6890)。其利用透明颤菌血红蛋白基因vgb构建重组质粒，通过接合转移的方式将vgb基因整合入褐黄孢链霉菌基因组中，获得可直接用于纳他霉素发酵生产的重组基因工程菌株。重组菌中VHb的表达可有效解决纳他霉素发酵生产中的氧供求矛盾，大幅度提高纳他霉素的产量，降低生产成本，带来巨大的经济效益。
- 专利分类
