[发明专利]一种高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法有效
| 申请号： | 201810975080.0 | 申请日： | 2018-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN109053867B | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 于佳平;张柳;董晓丽;卢晶晶;黄玲玲;徐德启;苏彩霞 | 申请（专利权）人： | 艾美诚信生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/14 | 分类号： | C07K14/14;C12P21/02 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 刘慧娟;李馨 |
| 地址： | 116600 辽宁省大连市中国（辽宁）自*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，所述方法包括种子活化、接种种子罐、移种发酵罐培养、流加补料培养、诱导表达以及离心收菌、破碎澄清的步骤，该方案可有效提升重组大肠杆菌在高密度培养条件下可溶性重组蛋白的表达量，较普通的培养方案在提升菌体密度的同时，明显提升可溶性蛋白的表达量，且具有无需调控pH，操作方便，可控性强，稳定性好、生产成本低以及可规模放大的特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高密度 发酵 表达 重组 轮状病毒 vp8 抗原 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)种子活化：将重组蛋白大肠杆菌工程菌接入培养基中活化；(2)接种种子罐：再将步骤(1)所得活化后的菌液接种种子罐培养至OD600≥4；(3)移种发酵罐培养：将种子罐中所有菌液转移至50L发酵罐，温度37℃，通空气并搅拌，维持溶氧在30％以上，培养至OD600≥4；(4)流加补料培养：按照3.5mL/min的速度起始，每小时递增3.5mL/min的速度，缓慢流加25％的葡萄糖，继续维持上述条件培养；(5)诱导表达：培养至OD600≥30，停止补葡萄糖，30min后，流加诱导培养基，按照10mL/min的速度起始，约30min后降温至18℃，添加0.5mM IPTG，每3h递增7mL/min的速度持续流加诱导培养基；诱导12h，停止培养；(6)离心收菌、破碎澄清，收集澄清后的液体即为重组轮状病毒ΔVP8*抗原的蛋白原液。
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