[发明专利]一种猪用疫苗载体在审
| 申请号： | 201810938346.4 | 申请日： | 2015-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN109652450A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 杜恩岐 | 申请（专利权）人： | 陕西诺威利华生物科技有限公司;武汉中拓康明生物科技有限公司;陕西溯源农业发展有限公司;黄光东 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/66;A61K39/187;A61P31/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100 陕西省咸阳市杨陵示*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪瘟用疫苗载体，属于生物医药领域。本发明的制备方法采用克隆猪IgG Fc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒，重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Western blot分析和共聚焦显微镜分析；重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验。本发明制备的表面展示猪IgG Fc重组杆状病毒在猪血清中具有较强的存活能力，可逃逸给血清补体对病毒的清除，从而提高疫苗免疫的有效抗原含量。 | ||
| 搜索关键词： | 重组杆状病毒 重组转移载体 疫苗载体 猪瘟 猪IgG 制备 重组杆状病毒感染 猪瘟病毒E2基因 表面展示载体 共聚焦显微镜 生物医药领域 疫苗效力检验 转染昆虫细胞 培养物上清 表面展示 存活能力 杆状病毒 昆虫细胞 血清补体 疫苗免疫 有效抗原 脂质体 猪血清 猪体 转座 种猪 分析 克隆 病毒 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种猪用疫苗载体，其特征在于：所述载体的制备方法包括以下步骤：1)克隆猪IgG Fc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；2)重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；3)重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒；4)重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Western blot分析和共聚焦显微镜分析；5)重组杆状病毒做补体拮抗活性检测；6)重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验；所述的步骤1)中猪IgG Fc基因序列为序列表中的SEQ ID NO:1；所述的步骤1)中猪瘟病毒E2基因序列为序列表中的SEQ ID NO:2；所述的步骤1)中猪瘟病毒E2基因的表达受CMV启动子的控制；所述的步骤1)中杆状病毒表面展示载体为VSVG假型化杆状病毒；所述重组杆状病毒使用的杆状病毒表面展示载体利用VSVG的TM和CTD替换了gp64的TM和CTD，提高了对哺乳动物细胞的转导效率和对血清补体的拮抗能力。
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- 2017-04-19 - 2018-11-02 - C12N15/866
- 本发明公开了一种重组表达制备EV71衣壳蛋白的方法，在EV71的VP1蛋白第62‑63个氨基酸之间插入His‑FLAG双亲和标签，再通过杆状病毒表达系统、Sf9细胞在无血清培养基中表达重组蛋白EV71，并利用亲和柱层析纯化得到重组蛋白EV71衣壳蛋白VP1。本发明方法通过His FF的纯化一步就得到了可溶性的EV71蛋白，免除了之前传统繁复的CsCl2密度梯度离心的纯化方法，且得率比之前提到了3倍，为之后EV71亚单位疫苗的研制打下了基础。
- 昆虫细胞中的AAV产生、其方法和组合物-201780010098.0
- 陈海峰 - 威洛克有限公司
- 2017-04-20 - 2018-10-23 - C12N15/866
- 公开了用于在体外在昆虫细胞中产生腺相关病毒(AAV)的组合物和方法。重组杆状病毒载体包含AAV衣壳蛋白基因表达盒(Cap)、AAV Rep基因表达盒(Rep)和杆状病毒同源区(hr)，所述杆状病毒同源区位于距离AAV表达盒中的起始密码子高达约4kb处。与包含Cap和Rep但没有hr的对照相比，携带包含Cap、Rep和hr的重组杆状病毒的昆虫细胞中杆状病毒和AAV的产生水平更高。此外，在用包含Cap、Rep和hr的重组杆状病毒感染的昆虫细胞中，杆状病毒和AAV产生的水平在细胞连续传代中相对稳定，而在包含含有Cap和Rep但没有hr的重组杆状病毒的昆虫细胞的连续传代中，杆状病毒和AAV产生的水平下降。
- 用于基因治疗载体的表达的杆状病毒系统-201280046259.9
- 莱昂内尔·加利贝尔;奥托-维海姆·莫腾;奥雷利安·雅各布 - 吉尼松公司
- 2012-07-27 - 2018-10-09 - C12N15/866
- 本发明涉及利用单次感染即可用于表达基因治疗载体的重组杆状病毒基因组。
- 一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及应用-201410345277.8
- 乔素梅 - 宁波欣安医疗科技有限公司
- 2014-07-21 - 2018-09-11 - C12N15/866
- 本发明公开了一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及其应用，特点是包括以下步骤：(1)制备含有H10基因的稳定的重组杆状病毒(rBV)；(2)Sf9细胞表达H10的SVP；(3)SVP的纯度和稳定性，该H10重组血凝素可用于预防禽流感H10N8的感染，免疫人或动物以产生抗体和保护作用，与针对H10N8或H10血凝素的抗体发生反应，优点是具有高效、低成本的特点，可用于预防H10N8禽流感病毒的感染，另外此重组血凝素在昆虫细胞中表达，不依赖于鸡胚，很容易进行工艺放大和规模化生产。
- 一种重组腺相关病毒的制备方法-201610035538.5
- 吴阳;徐富强;何晓斌;林坤章 - 中国科学院武汉物理与数学研究所
- 2016-01-20 - 2018-09-07 - C12N15/866
- 本发明公开了一种重组腺相关病毒(rAAV)的制备方法，包括以下步骤：(1)将目标基因构建在重组型杆状病毒上，所述重组杆状病毒其基因组整合了制备rAAV所必需的腺相关病毒的Rep基因、Cap基因以及携带有目标基因的ITR核心表达元件；(2)将步骤(1)中制得的重组杆状病毒感染宿主昆虫幼虫，使得所述宿主昆虫幼虫体内产生大量rAAV；(3)将步骤(2)中获得的宿主昆虫幼虫裂解，提取rAAV并进行纯化。本发明提供的方法，通过一种高度整合的重组杆状病毒感染昆虫幼虫，从而大量制备品质稳定的基因治疗用rAAV载体。
- 重组蛋白在粉纹夜蛾蛹中的表达-201680066504.0
- 何塞·安赫尔·马丁内斯·埃斯克里瓦诺;卡门·阿尔瓦拉多·弗拉多;埃德尔·雷伊托尔·萨维德拉;米格尔·西德费尔南德斯 - 替代基因公司
- 2016-09-19 - 2018-08-31 - C12N15/866
- 本发明包括提高重组蛋白表达效率的手段和方法，特别地优化在昆虫蛹中，特别地在粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,T.Ni)蛹中重组蛋白的工业化生产。此外，本发明还涉及包含杆状病毒的蛹本身，用杆状病毒或杆粒感染、转化、转导或转染的蛹，以及适合于执行本发明的方法的装置。
- 专利分类
