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[发明专利]一种可视化活细胞中内源性低丰度单分子RNA的方法及应用-CN202010828649.8在审
发明人：孙宁赫;陈丹阳;韩峰;卢应梅;叶露鹏;盛刚;凡西;周尔圆;王涛 -专利权人：南京医科大学
申请日： 2020-08-18 - 公布日： 2020-12-22 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种可视化活细胞中内源性低丰度单分子RNA的方法及应用，建立了一种CRISPR‑Sunspot成像系统，可以显著提高活细胞中内源性低丰度单分子RNA成像效率和信噪比，并可以在活细胞内进行RNA动态追踪和分析。本发明包含稳定表达CRISPR荧光蛋白成像组件的载体、细胞系和技术方法，本发明可用于在活细胞中放大单分子RNA的信号，实现对活细胞内低丰度RNA的单分子成像和动态观测；可以实现对沉默基因的转录激活和产生的RNA的可视化；可以实现对神经元中内源性RNA靶标的动态观测。
一种可视化细胞内源性低丰度单分子 rna 方法应用

[发明专利]家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用-CN201610290166.0有效
发明人：钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽、丝素轻链基因3’末端序列、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’末端序列，然后再顺序连接构建成质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40序列，第二表达框包括丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列，且在DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列之间含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建donor质粒的工作量，提高了家蚕丝腺生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。
家蚕中部生物反应器启动子通用型质粒及其构建方法应用

[发明专利]用于表达T4连接酶的家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其应用与方法-CN201610296590.6有效
发明人：钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于表达T4连接酶的家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其应用与方法。质粒以piggyBac转座子为基础并带有Amp抗性基因，包含有作为外源基因的T4连接酶基因和作为标记基因的绿色荧光EGFP基因的功能表达框，质粒用分子生物学方法构建，且DDDDK与丝素轻链基因polyA之间含有ApaI和NheI专一性的两个酶切位点，采用ApaI和NheI双酶切通用型质粒，与T4连接酶基因连接后，与辅助质粒共同注射到家蚕受精卵内，利用转座子特性使绿色荧光蛋白基因和T4连接酶基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，获得转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌T4连接酶蛋白。
用于表达 t4 连接酶家蚕中部生物反应器启动子通用型质粒及其应用方法

[发明专利]用于表达T4连接酶的家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其应用与方法-CN201610292120.2有效
发明人：钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于表达T4连接酶的家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其应用与方法。质粒以piggyBac转座子为基础并带有Amp抗性基因，包含有作为外源基因的T4连接酶基因和作为标记基因的绿色荧光EGFP基因的功能表达框，质粒用分子生物学方法构建，且DDDDK与丝素轻链基因polyA之间含有ApaI和NheI专一性的两个酶切位点，采用ApaI和NheI双酶切通用型质粒，与T4连接酶基因连接后，与辅助质粒共同注射到家蚕受精卵内，利用转座子特性使绿色荧光蛋白基因和T4连接酶基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，获得转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌T4连接酶蛋白。
用于表达 t4 连接酶家蚕后部生物反应器启动子通用型质粒及其应用方法

[发明专利]家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用-CN201610290881.4有效
发明人：钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得包含丝素轻链基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽基因、丝素轻链基因polyA、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’序列，然后再构建质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40的3’序列，第二表达框包括丝素轻链基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因polyA，且含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建转基因家蚕donor质粒的构建工作量，提高了家蚕生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。
家蚕后部生物反应器启动子通用型质粒及其构建方法应用

[发明专利]利用家蚕丝腺生物反应器合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2的方法-CN201510697644.5有效
发明人：钟伯雄;尤征英;叶露鹏;钱秋杰 -专利权人：杭州超丝生物科技有限公司
申请日： 2015-10-23 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用家蚕丝腺生物反应器合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2的方法。先构建家蚕合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2的载体pBac[3xP3‑DsRed]‑MaSp2质粒，再利用显微注射将质粒与辅助质粒导入到家蚕受精卵内，利用piggyBac转座子的转座特性使红色荧光蛋白基因和黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，制成转基因家蚕，蚕蛾自交使黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2基因纯合，育成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2的转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2，用于蜘蛛丝的开发利用，同时也可以用于提高蚕丝的机械性能。
利用家蚕生物反应器合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引蛋白方法

[发明专利]利用家蚕丝腺生物反应器合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1的方法-CN201510698099.1有效
发明人：钟伯雄;尤征英;叶露鹏;钱秋杰 -专利权人：杭州超丝生物科技有限公司
申请日： 2015-10-23 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用家蚕丝腺生物反应器合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1的方法。先构建家蚕合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1的载体pBac[3xP3‑DsRed]‑MaSp1质粒，再利用显微注射将质粒与辅助质粒导入到家蚕受精卵内，利用piggyBac转座子的转座特性使红色荧光蛋白基因和黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，制成转基因家蚕，蚕蛾自交使黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1基因纯合，育成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1的转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1，用于蜘蛛丝的开发利用，同时也可以用于提高蚕丝的机械性能。
利用家蚕生物反应器合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引蛋白方法

[发明专利]利用家蚕同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的方法-CN201510698879.6有效
发明人：钟伯雄;尤征英;叶露鹏;钱秋杰 -专利权人：杭州超丝生物科技有限公司
申请日： 2015-10-23 - 公布日： 2019-01-18 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用家蚕同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的方法。具体是将能够合成、分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的转基因家蚕品种杂交，育成杂交品种；另一方面进一步通过同蛾区阳性个体自交留种，选择出2个牵引丝蛋白基因都纯合的品种。本发明借助家蚕丝腺细胞特异地合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2转基因家蚕，利用杂交育种技术育成能够同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的杂交品种和纯系品种，用于蜘蛛丝的开发利用，同时也可以用于提高蚕丝的机械性能。
牵引丝蛋白黑寡妇蜘蛛分泌蛋白合成转基因家蚕杂交品种家蚕机械性能家蚕丝腺细胞杂交育种技术品种杂交自交留种蚕丝蜘蛛丝纯合纯系蛾区基因开发

[发明专利]一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法-CN201510085682.5有效
发明人：钟伯雄;叶露鹏;钱秋杰;尤征英;车家倩;张玉玉;宋佳 -专利权人：浙江大学
申请日： 2015-02-17 - 公布日： 2018-04-20 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明公开了一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法。采用分子生物学技术构建包含类转录激活子效应蛋白DNA序列和piggyBac转座酶DNA序列的辅助质粒，在体外转录成mRNA；采用显微注射法将该辅助质粒的mRNA与含有外源基因的piggyBac转座子质粒的DNA一起导入到动物的受精卵中，获得外源基因能够稳定遗传和表达的转基因动物；根据标志基因或基因的表达特征筛选出转基因阳性个体；本发明方法可以使piggyBac转座子在TALE‑PBase融合蛋白的作用下高效的插入宿主生物的基因组中，可显著地提高piggyBac转座子介导的转基因效率，为获得转基因动物以及插入诱变等研究提供帮助。
种类转录激活效应蛋白高效转基因方法

[发明专利]用于表达T4连接酶的家蚕中部丝腺生物反应器通用型质粒及其应用与方法-CN201610290824.6在审
发明人：钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2016-09-28 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于表达T4连接酶的家蚕中部丝腺生物反应器通用型质粒及其应用与方法。质粒以piggyBac转座子为基础并带有Amp抗性基因，包含有作为外源基因的T4连接酶基因和作为标记基因的绿色荧光EGFP基因的功能表达框，质粒用分子生物学方法构建，且DDDDK与丝素轻链基因polyA之间含有ApaI和NheI专一性的两个酶切位点，采用ApaI和NheI双酶切通用型质粒，与T4连接酶基因连接后，与辅助质粒共同注射到家蚕受精卵内，利用转座子特性使绿色荧光蛋白基因和T4连接酶基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，获得转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌T4连接酶蛋白。
用于表达 t4 连接酶家蚕中部生物反应器通用型质粒及其应用方法

[发明专利]家蚕中部丝腺生物反应器通用型质粒及其构建方法和应用-CN201610287168.4在审
发明人：钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2016-09-21 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种家蚕中部丝腺生物反应器通用型质粒及其构建方法和应用。获得丝胶蛋白1基因启动子、His 6序列、DDDDK序列、丝素轻链蛋白信号肽、丝素轻链蛋白基因3’末端序列、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40序列，然后再构建质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40序列，第二表达框包括丝胶蛋白1基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链蛋白基因3’末端序列，且含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建donor质粒的工作量，提高了家蚕中部生物反应器工作效率。
家蚕中部生物反应器通用型质粒及其构建方法应用

[实用新型]一种组合式接线板-CN201520752583.3有效
发明人： 叶露鹏 -专利权人：嘉兴职业技术学院
申请日： 2015-09-25 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： H01R13/514 文献下载
摘要：本实用新型提出一种组合式接线板，长度和角度可调，开关单元和各插座单元均设有柱体部分(4)，柱体部分(4)的左侧连接有连接段(5)，开关单元的连接段(5)与组合式接线板的进线(1)连接，插座单元的连接段(5)设有插脚(2)，柱体部分(4)的下部设有转动体，转动体设有插孔，开关单元、各插座单元依序可拆式插接；插口(7)内设有弹性触片，弹性触片与位于同一个插座单元的插脚(2)电连接，同一个插座单元的插脚(2)、插孔之间电连接；组合式接线板的进线(1)、开关、开关单元的插孔、与开关单元的插孔插接的插脚(2)、相邻插座单元的插孔插脚(2)依序电连接。
一种组合式接线

[实用新型]一种组合接线板-CN201520754054.7有效
发明人： 叶露鹏 -专利权人：嘉兴职业技术学院
申请日： 2015-09-25 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： H01R13/52 文献下载
摘要：本实用新型提出一种组合接线板，防尘性能较好，它包括开关单元和多个插座单元，开关单元左侧电连接组合接线板的进线(1)，开关单元右侧设有插孔，每个插座单元左侧设有插脚(2)，每个插座单元右侧设有插孔，开关单元、各插座单元依序通过插孔和插脚(2)可拆式插接且电连接；各插座单元的下端均设有作为插口区的凹陷(9)，凹陷(9)的深度足以容纳外接插头，凹陷(9)侧壁设有供外接插头的线缆进出的进出孔(10)。
一种组合接线

[实用新型]组合式接线板-CN201520751928.3有效
发明人： 叶露鹏 -专利权人：嘉兴职业技术学院
申请日： 2015-09-25 - 公布日： 2016-01-06 - 主分类号： H01R13/52 文献下载
摘要：本实用新型提出一种组合式接线板，防尘和防水性能较好，它包括基本单元和多个插座单元，基本单元左侧电连接组合式接线板的进线(1)，基本单元右侧设有插孔，每个插座单元左侧设有插脚(2)，每个插座单元右侧设有插孔，基本单元、各插座单元依序通过插孔和插脚(2)可拆式插接且电连接；各插座单元的下端为插口区(6)，基本单元和各个插座单元的下端的周边均设有周向分布的用于支撑基本单元和各个插座单元的至少三个支柱(9)，支柱(9)的高度大于外接插头的厚度。
组合式接线

[实用新型]一种组合插座-CN201520751952.7有效
发明人： 叶露鹏 -专利权人：嘉兴职业技术学院
申请日： 2015-09-25 - 公布日： 2016-01-06 - 主分类号： H01R13/514 文献下载
摘要：本实用新型提出一种组合插座，长度可调，它包括开关单元和多个插座单元，开关单元左侧电连接组合插座的进线(1)，开关单元右侧设有插孔，每个插座单元左侧设有插脚(2)，每个插座单元右侧设有插孔，开关单元、各插座单元依序通过插孔和插脚(2)可拆式插接且电连接；每个插座单元设有右端与插座单元左侧转动连接的连接杆(3)，对于与开关单元相邻的插座单元，其连接杆(3)左端与开关单元右侧螺纹连接，对于相邻的两个插座单元之间，右侧插座单元的连接杆(3)左端与左侧插座单元右侧螺纹连接。
一种组合插座

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