[发明专利]一种利用蓝藻合成塔格糖的方法在审
| 申请号： | 201810665124.X | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108728475A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 蒿飞;朱文博;陈贤情;夏文豪;杨月;王筱;王文;杨慧;江会峰 | 申请（专利权）人： | 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12P19/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市南湖区昌盛*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用蓝藻来生产塔格糖的方法，步骤：1)首先根据蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，然后将HXK、FbaA以及phytase三个基因插入到载体NSI上，得到需要的重组载体NSI‑HFP；2)将载体NSI‑HFP转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接带有氯霉素抗性的液体培养基，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；4)单克隆转基因蓝藻Syn7942在合适条件下培养，添加IPTG诱导基因HXK、FbaA以及phytase的表达，这些酶将以蓝藻光合作用产生的果糖为底物合成塔格糖；5)分离提纯。本发明以蓝藻为底盘生物进行改造合成塔格糖，生产原料仅需阳光和水分等，生产设备和生产环境构建简单，生产成本大幅度降低。 | ||
| 搜索关键词： | 蓝藻 转基因蓝藻 合成塔 光合作用 氯霉素 固体培养基 氯霉素抗性 液体培养基 初步筛选 分离提纯 合适条件 基因插入 基因构建 目的基因 生产环境 生产设备 生产原料 整合载体 重组载体 转接 基因组 生产塔 底盘 底物 构建 果糖 生产成本 筛选 细胞 基因 转化 改造 | ||
【主权项】：
1.一种利用蓝藻合成塔格糖的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：1)首先，基于蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，再根据蓝藻Syn7942细胞密码子偏好性优化基因HXK、FbaA以及phytase的密码子，然后将三个基因插入到载体NSI上，得到重组载体NSI‑HFP；2)基于蓝藻Syn7942在自然状态下能够吸收外源基因的特性，将重组载体NSI‑HFP转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至带有氯霉素抗性的液体培养基中，待蓝藻生长出后，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；4)将验证成功的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至液体培养基，在一定条件下培养，待蓝藻长到OD730大于或等于1时，添加IPTG诱导基因HXK、FbaA以及phytase的表达，表达的酶以蓝藻光合作用产生的果糖为底物合成塔格糖；5)对产物塔格糖进行分离提纯。
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- 本发明属于生物技术领域，具体公开了一种重组乳酸乳球菌及其构建方法和应用。本发明构建的一种重组乳酸乳球菌能够表达人内皮抑素且重组乳酸质粒能稳定遗传。根据本发明所构建的重组乳酸乳球菌，能够应用于制备抗肿瘤药物或食品中，包括：抑制肿瘤的生长、延长荷瘤模型生存期、促进肿瘤大面积坏死、抗肿瘤转移的药物或食品中的应用。
- 一种利用短短芽孢杆菌制备高纯度隐地蛋白的方法-201811595939.1
- 刘胜;蒙亮;刘欣;王鹏;顿先才;徐国华;申婵;胡艳红 - 华中科技大学鄂州工业技术研究院;华中科技大学
- 2018-12-25 - 2019-04-26 - C12N15/74
- 本发明提供了一种利用短短芽孢杆菌制备高纯度隐地蛋白的方法，步骤包括：S1、将隐地蛋白的编码基因插入到以短短芽孢杆菌为宿主的质粒中；S2、将步骤S1所得质粒转入短短芽孢杆菌宿主中；S3、发酵培养步骤S2所得短短芽孢杆菌，所述发酵培养的培养条件为：T2培养基、温度30～33℃、转速120～200rpm、发酵培养时间24～60h；S4、收集发酵后的菌液，分离提取隐地蛋白液；所述分离提取方法包括：离心菌液收集上清，对上清液进行切向流超滤获得滤液、超滤浓缩滤液即得隐地蛋白液。该方法能够简便快速的获取高纯度的隐地蛋白，且所得的隐地蛋白溶液直接用作农用抗菌抑菌剂能够达到明显促进植物生长的效果，具备良好的应用前景。
- 用于鼠伤寒沙门氏菌基因靶向点突变的重组质粒及相应的基因靶向点突变方法-201811622618.6
- 刘永生;敬文宪;李学瑞;周建华;马丽娜;陈启伟 - 中国农业科学院兰州兽医研究所
- 2018-12-28 - 2019-04-19 - C12N15/74
- 本发明提供用于鼠伤寒沙门氏菌基因靶向点突变的重组质粒，所述重组质粒含有Kan抗性基因与sacB基因片段。本发明还提供应用该重组质粒进行鼠伤寒沙门氏菌基因靶向点突变的方法。本发明结合red同源重组系统和自杀性质粒构建系统这两种方法的优点，成功构建了同时具备以上两种功能的重组质粒，同时本发明还结合了目前成熟的商品化的对质粒中基因进行点突变的试剂盒，成功的对鼠伤寒沙门氏菌进行了基因的靶向点突变。
- 用于转化猪肺炎支原体的载体，转化的猪肺炎支原体菌株及其用途-201380046932.3
- 路易斯·冈萨雷斯冈萨雷斯;豪梅·皮诺尔列巴斯;霍尔迪·蒙塔内格拉特;玛利亚·卡马特斯马莱特;恩里克·奎尔罗穆里洛;玛尔塔·西塔亚阿尔诺 - 海博莱科学有限公司
- 2013-07-09 - 2019-04-16 - C12N15/74
- 本发明涉及猪肺炎支原体突变株，以及用于制备所述突变株的方法。其还涉及用于所述方法的载体、疫苗组合物以及包含用于针对猪地方性肺炎和其他猪疾病的所述突变株的接种试剂盒。本发明还涉及将猪肺炎支原体作为用于表达重组蛋白质和其他目的DNA序列的宿主的应用。
- 一种基因编辑方法在东方拟无枝酸菌中的应用-201811552697.8
- 倪瑶;魏维;钱秀萍;夏兴;戈梅 - 上海交通大学;上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司
- 2018-12-18 - 2019-04-12 - C12N15/74
- 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9编辑系统在东方拟无枝酸菌中进行基因敲除与敲入的方法，该方法将CRISPR/Cas9编辑质粒pLYNY04引入东方拟无枝酸菌Amycolatopsis orientalis HCCB10007中，同时实现了基因敲除与敲入，可以简化遗传操作，提高东方拟无枝酸菌的整合效率。本发明还公开了一种含有gtfD基因同源臂的CRISPR/Cas9编辑质粒pLYNY04，将eGFP插入东方拟无枝酸菌的靶标序列，以便于检测基因编辑结果。本发明还公开了一种含有gtfD基因同源臂的CRISPR/Cas9编辑质粒pLYNY04的应用。
- 一种利用内源CRISPR-Cas系统进行原核生物基因组编辑的方法-201510639204.4
- 佘群新;梁运祥;李英俊;潘赛夫;任敏;冯明霞;彭楠 - 华中农业大学
- 2015-09-30 - 2019-04-02 - C12N15/74
- 本发明一种利用内源CRISPR‑Cas系统进行原核生物基因组编辑的方法。在对含有内源CRISPR‑Cas系统的原核生物进行基因组编辑时，只需构建一个同时携带人工CRISPR簇和供体DNA的编辑质粒，在内源CRISPR系统对基因组发生DNA干涉后通过同源重组达到对基因组的编辑。其最大的优点在于：应用宿主范围广，所有含有内源CRISPR‑Cas系统的细菌和古菌均可操作；可用于多种编辑方式，缺失、插入和点突变等均可操作；更高的编辑效率，筛选阳性率高，背景低；流程简单，时间周期短，大大减轻原核生物基因组编辑的工作量。
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