[发明专利]一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201810155763.1 | 申请日： | 2018-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN108103021B | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 魏君;蔡萌 | 申请（专利权）人： | 武汉睿健医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0797 | 分类号： | C12N5/0797;A61K35/30;A61P25/28 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法及其应用，本发明的细胞制备方法包括使用人源诱导多能干细胞进行无滋养细胞的单层细胞无血清培养，同时使用小分子抑制剂进行诱导细胞定向分化为神经干细胞。本发明证明这种方法诱导得到的神经干细胞具有分化为神经元的能力，且具有电生理功能。本发明使用纯化学分子替代蛋白质信号拮抗物，使用非动物源性的生长因子来替换传统的动物源性的生长因子，从而实现了无血清无动物源性的神经干细胞诱导培养方法，解决了动物源性培养方法制约神经干细胞在临床上的使用问题；同时无需使用滋养层细胞，因而得到的细胞不受其它细胞的污染，解决了长久以来滋养细胞污染的问题，在临床上更安全。 | ||
| 搜索关键词： | 神经干细胞 动物源性 生长因子 诱导型 细胞 人源 制备 滋养 诱导多能干细胞 神经元 小分子抑制剂 蛋白质信号 电生理功能 无血清培养 滋养层细胞 单层细胞 定向分化 细胞污染 细胞制备 诱导培养 诱导细胞 传统的 拮抗物 血清 替换 应用 诱导 分化 替代 污染 制约 安全 | ||
【主权项】：
1.一种人源诱导型神经干细胞的制备方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：S1、人诱导多能干细胞传代培养；S2、移出S1的培养基并更换为无血清神经诱导培养基，然后在无血清神经诱导培养基中利用人诱导多能干细胞定向诱导培养神经干细胞，所述神经诱导培养基培养液成分包括N2B27基础培养基和神经诱导化合物，所述神经诱导化合物包括PD98059和JW55，PD98059在神经诱导培养基培养液中的终浓度为8μM，JW55在神经诱导培养基培养液中的终浓度为5μM；S3、在神经干细胞扩增培养基中扩增培养S2中获得的神经干细胞。
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- G·I·尼斯托尔;H·S·基尔斯特德 - 加利福尼亚大学董事会
- 2003-07-11 - 2018-12-07 - C12N5/0797
- 本发明提供具有神经胶质细胞如少突胶质细胞和它们的前体的标记物的神经细胞群。通过在促进具有所需表型或功能性能力的细胞富集的条件下分化多能干细胞如人胚胎干细胞而产生所述细胞群。可使用分化因子和促分裂原的各种组合来生产携带有少突胶质细胞前体细胞标记物的细胞群。进一步分化后形成成熟少突胶质细胞的复杂突起特征。这些细胞能形成髓鞘，并可用于治疗性地改善中枢神经系统的功能。
- 一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法-201810650245.7
- 安徽 - 安徽
- 2018-06-22 - 2018-11-16 - C12N5/0797
- 本发明公开了一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，包括以下步骤，向酶解处理后的脑干细胞组织液加入人体的生理盐水，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境，本发明涉及干细胞技术领域。该人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，达到了实现多组用免疫荧光物质染色，便于研究追踪脑干细胞的分化和传代率，保证实验数据真实和准确性，实现吸取培养液的同时定量量取培养液，提高吸取效率，同时缩短吸取过程消耗的时间，保证脑干细胞活性的目的。
- 诱导多能干细胞向神经祖细胞分化的无血清培养体系-201810817902.2
- 甄威;刘子铖;王楠 - 九三极恒生物医药科技江苏有限公司
- 2018-07-24 - 2018-11-16 - C12N5/0797
- 本发明属于干细胞生物学和细胞培养技术领域，提出了促进诱导多能干细胞向神经祖细胞分化的无血清培养体系，具体包括无血清分化基本培养基及促进神经组细胞分化的添加物。其中，无血清基本培养基必要成分包括：DMEM/F12培养基，人血清白蛋白，L‑谷氨酰胺，D‑葡萄糖，维生素C，N2/B27细胞培养添加剂，非必需氨基酸。促进神经祖细胞分化的添加物具体包括：SB431542，皮啡肽，成纤维生长因子‑2，维甲酸，脑源性神经营养因子。用此培养基可以帮助提高细胞混合体系中的神经祖细胞分化，减少向其他类型细胞的分化，从而最终得到高纯度的神经祖细胞。
- 人视网膜祖细胞的表型谱-201810203142.6
- 迈克尔·J·杨;彼得·Y·巴拉诺夫 - 斯格本斯眼科研究所
- 2013-02-15 - 2018-09-28 - C12N5/0797
- 本发明涉及具有以下阳性表面标记物的人视网膜祖细胞的实质上同质的细胞群：SSEA4、CD73、PTK7和PSA‑NCAM。本发明还涉及利用细胞分选技术从人组织中制备这种实质上同质的细胞群的方法。
- 一种利用非整合质粒载体诱导神经干细胞的方法及其用途-201510628868.0
- 陈志国;张愚;唐玺和 - 首都医科大学宣武医院
- 2015-09-28 - 2018-09-25 - C12N5/0797
- 本发明提供了一种利用非整合质粒载体诱导神经干细胞的方法，包括血液中单个核细胞的提取、血液中单个核细胞的扩增、非整合性质粒电转染、神经干细胞培养的步骤。本发明将人外周血中单个核细胞重编程为神经干细胞，可在体外扩增60代以上，表达神经干细胞相关基因，能分化出神经元，星形胶质细胞及少突胶质细胞，其分化的神经元能具有电生理特点，且操作简单，创伤性极小。
- 一种高效、快捷的诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的方法-201810128551.4
- 顾雨春;徐浩 - 北京呈诺医学科技有限公司
- 2018-02-08 - 2018-08-10 - C12N5/0797
- 本发明公开了一种高效、快捷的诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的方法，属于神经科学干细胞技术领域。步骤1：活化诱导性多能干细胞单层培养；步骤2：诱导性多能干细胞诱导培养；步骤3：诱导性多能干细胞诱导分化神经干细胞。本发明具有操作便捷、成本低、产量大、分化纯度高、可重复性强等优点。整个环节无动物源性细胞和其它成分，不仅大大缩短诱导神经干细胞所需的时间，还大大提高了iPS来源神经干细胞的安全性，为进一步利用患者自体细胞诱导的iPS大规模生产临床应用级别的神经干细胞提供了一种全新的方法。
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