[发明专利]增强型绿色荧光蛋白标记玉米丝黑穗菌株的方法及其菌株和应用

摘要

本发明涉及植物病理学技术领域，具体涉及一种增强型绿色荧光蛋白标记玉米丝黑穗菌株的方法及其菌株和应用。本发明提供的一种增强型绿色荧光蛋白标记玉米丝黑穗菌株的方法构建了mig2－5－1启动子调控EGFP表达的载体PHD3－mig2－5－1－EGFP，利用原生质体遗传转化法将载体转入玉米丝黑穗菌内，并且采用PCR方法和荧光检验可以发现mig2－5－1启动子能诱导EGFP在菌株中获得大量且高效地荧光表达，同时能稳定地遗传表达。本发明提供的增强型绿色荧光蛋白标记玉米丝黑穗菌株，能够用于抗玉米丝黑穗病的玉米品种的筛选与鉴定方面，鉴定结果可靠，操作方便，简单易行，鉴定周期短，不受环境影响，重复性高。

主权项

1.一种增强型绿色荧光蛋白标记玉米丝黑穗菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)构建增强型绿色荧光蛋白标记的表达载体PHD3－mig2－5－1－EGFP；(b)制备玉米丝黑穗菌原生质体；(c)利用原生质体遗传转化法，将表达载体PHD3－mig2－5－1－EGFP转入玉米丝黑穗菌内；(d)对标记增强型绿色荧光蛋白的玉米丝黑穗菌株进行检测和筛选；(e)获得增强型绿色荧光蛋白标记的玉米丝黑穗菌株；其中：表达载体PHD3－mig2－5－1－EGFP是由启动子mig2－5－1与EGFP连接构建；mig2－5－1启动子片段序列为：AACCATCTTTTCCCCACCCATTGGACGCCAACCGTGGTGACCTGTCCCACCTAGTGGAGCGTTCCAACCCACACCTTGAGGTCGAGATCCAGTAGCCACATATTCCACGCATTTCTGGATTCGTTTCCAGTATGTGATCAAGTTGGTGGGCCTTGCAACCATCTTTTCCCCACCCATTGGACGCCAACCGTGGTGACCTGTCCCACCTAGCTCTTGACTCATCACAGCCGTTACTCTGCATTGCTTGCTCTCGAT。