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[发明专利]荧光标记不同雌激素受体的单克隆肿瘤细胞系的构建方法-CN202211046542.3有效
发明人：付玲;高秀娟;周一夫;黄歆媛;陈忠云 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2022-08-30 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明涉及多色荧光分别标记不同雌激素受体亚型的单克隆肿瘤细胞系的构建方法，属于生物工程技术领域。构建方法为：将不同的荧光蛋白基因分别与不同的雌激素受体基因序列或不同的雌激素受体干扰序列构建质粒；不同的荧光蛋白基因用于表达不同荧光蛋白，该荧光蛋白作为荧光标签，用于标记不同的雌激素受体过表达或沉默；将得到的质粒分别转染到肿瘤细胞中，得到不同的稳定转染细胞株；再将稳定转染细胞株采用无限稀释法筛选出单克隆细胞系，即得到多色荧光分别标记不同雌激素受体亚型的单克隆肿瘤细胞系。本发明能够得到转染效果良好的、标记不同雌激素受体(ERs)表达水平的六色鼠源性黑素瘤B16单克隆细胞系，且具有良好的传代稳定性。
荧光标记不同雌激素受体单克隆肿瘤细胞系构建方法

[发明专利]一种报告蛋白质粒、细胞株及其构建方法与应用-CN202310477931.X在审
发明人：黄宇虹 -专利权人：香港中文大学深圳研究院
申请日： 2023-04-26 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种报告蛋白质粒、细胞株及其构建方法与应用，报告蛋白质粒为pLVX‑CMV‑mClover3‑FHA2‑FOXOsig‑mRuby3‑IRES‑Hyg荧光蛋白，其利用胰岛素代谢通路的AKT活化作为报告指标，AKT活化后，磷酸化下游分子FOXO信号肽(FOXOsig)，使FOXO信号肽与FHA2片段结合，融合在这两个分子两端的荧光蛋白mClover3和mRuby3相互靠近，当mClover3的激发光照后，发生荧光共振转移，检测到mRuby3的荧光信号。通过该报告蛋白质粒，可用荧光读板机实时读取活细胞胰岛素信号，或利用流式细胞技术进行高通量细胞筛选。mClover3和mRuby3荧光蛋白作为荧光共振转移蛋白组合，比其它荧光组合有更强的荧光强度，利于提高检测灵敏度和检测精度。由该报告蛋白质粒构建的报告细胞株应用于流式细胞分选，可快速大量获取所需数据，显著提高筛选分子机制研究的效率。
一种报告蛋白质粒细胞株及其构建方法应用

[发明专利]基因组靶向修饰方法-CN201910316583.1有效
发明人：李文渊;张博;佟向军;韩冰舟 -专利权人：北京大学
申请日： 2019-04-19 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明涉及一种基因靶向修饰的方法，所述方法基于多元件的正负载体敲入策略，结合利用基因组定点修饰技术，将所述正负载体敲入目的基因。所述载体包含正元件和负元件。正元件中包含能够还原目的基因表达的基因编码序列，因而不会破坏基因的功能，负元件则主要是破坏內源基因功能的元件，同时，可以根据不同的目的设计外源DNA序列，从而达到荧光标记与转换、基因精确突变、基因拯救等多种效果。
基因组靶向修饰方法

[发明专利]一种评价CAR功能的方法及其应用-CN202310780645.0在审
发明人：施明;周雨思;林添;刘丹;李思瑾;管章春;郑骏年 -专利权人：徐州医科大学
申请日： 2023-06-29 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种评价CAR功能的方法及其应用。所述评价CAR功能的方法是基于构建含有NF‑κB转录因子应答元件和IFNγ启动子的Jurkat‑Reporter细胞所建立的CAR功能的评价方法；该方法能够快速方便的评价CAR的功能，以及筛选、鉴定影响CAR功能的关键基因，且具有较高的特异性、敏感性、准确性和精密性，有利于CAR修饰细胞药物的质量控制和临床应用。本发明还提供了一种评价CAR基底信号的方法，所述评价CAR基底信号的方法包括使用本发明构建的Reporter系统，所述Reporter系统或可用于对不同CAR‑T所产生的基底信号进行定性、定量评价。
一种评价 car 功能方法及其应用

[发明专利]一种用于检测神经副肿瘤综合征的表达载体及其制备方法-CN202310428950.3在审
发明人：刘亮;郝峻巍;柴国梁;刘海杰;陈腾 -专利权人：首都医科大学宣武医院
申请日： 2023-04-20 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明提供一种用于检测神经副肿瘤综合征(paraneoplastic neurological syndromes，PNS)的表达载体，以去掉前导肽区域的原核表达载体为基础，所述原核表达载体包含MBP标签、EGFP标签和目的基因及羧基端的his标签，其中，所述EGFP标签和目的基因之间设置有HRV 3C酶切位点。在此基础上，对目的基因和标签基因进行了基因优化，得到了一种提高PNS蛋白可溶性和表达量的原核表达体系。本发明提供的表达载体和优化PNS基因及EGFP基因序列能够特异性的高表达可被PNS抗体结合的抗原蛋白，使得表征神经副肿瘤综合征的PNS抗体能够通过膜条试纸被检测出。
一种用于检测神经肿瘤综合征表达载体及其制备方法

[发明专利]一种追踪土传植物致病菌传播耐药基因的荧光标记方法-CN202210321403.0有效
发明人：韦中;江高飞;张煜铃;徐阳春;沈其荣 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-03-30 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种追踪土传植物致病菌传播耐药基因的荧光标记方法，通过荧光标记技术、乳糖操纵子技术和聚合酶链式反应技术结合，在植物致病菌基因组中glms基因后插入调节基因（lacI）和红色荧光基因；将含有LacI阻遏蛋白结合位点的lacZ启动子区域与绿色荧光基因的多重抗性可转移质粒转入至植物致病菌，植物致病菌仅红色荧光表达。通过植物致病菌跨种属传播ARGs评估方法，供体菌株体内抗性质粒转移至受体菌株，质粒荧光表达抑制解除，通过荧光显微镜和高通量流式细胞仪可进行分选回收。这种方法能追踪区分供受体菌株，有利于评价土传植物致病菌与ARGs的互作机制，为土传病害阻控策略的制定提供理论依据。
一种追踪植物致病菌传播耐药基因荧光标记方法

[发明专利]一种基于人DKK3基因启动子活性检测系统及其构建方法-CN202211244266.1在审
发明人：刘莉莉;邓耀棠;赵志强;李国樑;周家圳;陈嘉斌;欧嘉怡;张伟鹏;陈星宇 -专利权人：广东省职业病防治院（广东省职业卫生检测中心）
申请日： 2022-10-12 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明属于表观遗传技术领域，具体涉及一种基于人DKK3基因启动子活性检测系统及其构建方法。本发明提供了一种基于人DKK3启动子区的荧光素酶报告基因载体，将DKK3基因启动子连接在pGL4.10质粒中，得到荧光素酶报告基因载体；将SP3基因的编码区序列克隆至pcDNA3.1(+)质粒中，得到SP3过表达质粒。HK‑2细胞中共转染pGL4.10‑DKK3报告基因和pcDNA3.1(+)‑SP3过表达质粒，多功能酶标仪下检测DKK3启动子区的活性。本发明还提供上述技术方案所述的人DKK3基因启动子活性检测系统的应用。
一种基于 dkk3 基因启动子活性检测系统及其构建方法

[发明专利]一种适用于筛选高产天然氨基酸的菌株的方法-CN202111597667.0在审
发明人：霍毅欣;马晓焉;郭昊;孙丽超 -专利权人：北京理工大学
申请日： 2021-12-24 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明涉及一种适用于筛选高产天然氨基酸的菌株的方法，属于生物工程技术领域。本发明所提供的筛选方法是按照包括以下步骤进行：以蛋白质氨基酸的翻译元件作为筛选标记，将其核酸序列中某一氨基酸的部分或全部密码子替换为不编码氨基酸的核苷酸序列组合，在微生物的突变库中转化入筛选标记，通过检测筛选标记造成的菌株表型差异，可以从突变菌株中挑选出高产氨基酸的菌株。本发明所提供的方法可以高通量从不同微生物菌种筛选高产天然氨基酸的菌株。本发明所提供的方法可以高通量从不同微生物菌种筛选高产天然氨基酸的菌株。
一种适用于筛选高产天然氨基酸菌株方法

[发明专利]噬菌体生物传感器-CN202211104475.6在审
发明人：周海银;张志乾;陈西朋;吴嵩;罗元廷;江翱;吴奕瑞;何茜;刘丽花 -专利权人：态创生物科技（广州）有限公司;广州市乾相生物科技有限公司
申请日： 2022-09-09 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种噬菌体生物传感器，包括：宿主菌；报告质粒，所述报告质粒表达荧光蛋白，在荧光蛋白表达基因的上游插入噬菌体诱导型启动子。本发明公布了一种噬菌体生物传感器，由宿主菌和报告质粒组成。噬菌体浸染宿主菌后，通过报告质粒上的噬菌体诱导启动子开启含MCP结合位点和PCP结合位点重复排列的非编码RNA表达，非编码RNA募集MCP‑GFP‑N和PCP‑GFP‑C，激活GFP荧光。通过荧光强度检测即可对噬菌体效价进行定量。本发明的噬菌体生物传感器具有操作简单、耗时短和准确性高等优点，非常适用于各领域的噬菌体活性及效价检测，尤其是药物开发和酶进化领域。
噬菌体生物传感器

[发明专利]用于诊断成像的工程化微生物-CN202180057644.2在审
发明人：杰弗里·瓦格纳;弗雷德·默梅尔斯坦;卡尔·诺维娜;罗伯特·迪斯特尔;史蒂文·奈伊;巴里·波利斯基 -专利权人：微生物机器公司
申请日： 2021-06-01 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明尤其涉及表达(i)表面蛋白和(ii)检测标志物的工程化细菌，所述表面蛋白特异性地与暴露于患病胃肠道组织和/或胆管、胰管或胆总管等内衬的上皮组织的上皮细胞的内腔侧的细胞膜受体相互作用。本技术的工程化细菌可用于检测患病胃肠道组织和/或胆管、胰管或胆总管等内衬的上皮组织。
用于诊断成像工程微生物

[发明专利]一种用于体外检测致突变因子的报告质粒、细胞模型及其应用-CN202210764134.5有效
发明人：陈振文;霍学云;孙逸竹;王妍;杜小燕 -专利权人：斯贝福（北京）生物技术有限公司;首都医科大学
申请日： 2022-06-30 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明属于生物学领域，公开了一种用于体外检测致突变因子的报告质粒、细胞模型及其应用。所述荧光报告质粒包括至少一个荧光报告基因及其启动子，每个所述荧光报告基因的启动子后插入有微卫星重复片段，所述微卫星重复片段使所述荧光报告基因的密码子发生框移而不产生发光形式的信号。将所述荧光报告质粒转染至宿主细胞即可构成细胞模型。该荧光报告质粒和细胞模型可通过所述微卫星重复片段的回复性突变用以检测致突变因子。本申请检测系统对于致突变因子的检测具有广谱性、灵敏度、准确性高的特点。
一种用于体外检测突变因子报告质粒细胞模型及其应用

[发明专利]一种“南林895杨”外源基因高效瞬时转化体系的建立方法-CN202211186282.X有效
发明人：陆静;李淑娴;尹佟明 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2022-09-27 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种“南林895杨”外源基因高效瞬时转化体系的建立方法，属于生物技术领域。本发明针对“南林895”组培苗叶片特性建立了最适配比的酶解溶液和最佳酶解时间，以及通过对叶片进行暗培养、调整孵化温度时间、转化温度、转化使用的混匀仪器等条件，获得了大量原生质体和提高了转化效率，大大缩短了工作时间，并且重复性极好。本发明提供的“南林895”外源基因瞬时转化体系的建立方法，为原生质体瞬时转化及基因表达特性的研究提供了一种有效途径，为研究亚细胞定位、蛋白质‑蛋白质相互作用、染色质免疫沉淀、蛋白质印迹、单细胞测序和基因组编辑等领域技术提供前提，也为其它非模式植物外源基因瞬时转化体系的建立提供参考。
一种南林 895 基因高效瞬时转化体系建立方法

[发明专利]一种以质粒响应荧光酵母传感器为基础的亚硝胺TD50-CN202211245427.9在审
发明人：郑枫;丁昊天;赵宇宁 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2022-10-12 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明公开了一种以质粒响应荧光酵母传感器为基础的亚硝胺TD50预测方法，包括：包括：使用质粒响应荧光酵母传感器，该酵母传感器的质粒以GFP为报告蛋白，通过对暴露于亚硝胺化合物后GFP表达水平进行测定，采用荧光蛋白诱导倍数FI对遗传毒性进行定量，根据亚硝胺化合物的FI1.5，对无TD50数据报道的亚硝胺化合物的TD50进行预测；其中，所述的质粒响应荧光酵母传感器是能够表达GFP的酿酒酵母菌株，它是转入了质粒pMAG1‑yEGFP构建而成。本发明方法具有成本低、省时、信息可靠且样品用量少的优点，可以广泛应用，有利于提高药物研发速度与质量。
一种质粒响应荧光酵母传感器基础亚硝胺 td base sub 50

[发明专利]一种粒细胞或单核细胞标记系统及其标记方法和应用-CN201810801789.9有效
发明人：弗洛伦特·津浩克斯;刘兆远 -专利权人：上海市免疫学研究所
申请日： 2018-07-20 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明提出了一种粒细胞和单核细胞标记系统，所述标记系统包括Ms4a3基因、IRES‑Cre重组酶和LoxP‑Stop‑LoxP‑reporter报告系统。所述Ms4a3基因为粒细胞和单核细胞前体所特异性表达的基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提出了所述标记系统的构建方法以及检测方法。本发明还提出所述系统在造血系统发育、免疫细胞发育和功能、肿瘤学研究等方面的广泛应用。
一种粒细胞单核细胞标记系统及其方法应用

[发明专利]荧光蛋白标记的微管蛋白和微管结合蛋白通用型双价载体的构建-CN202210953263.9在审
发明人：徐臣善;徐爱红;祝晓莉;宋建;王柏文 -专利权人：德州学院
申请日： 2022-08-10 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：本发明提供了荧光蛋白标记的微管蛋白和微管结合蛋白通用型双价载体的构建，过程为：第一阶段为构建GFP‑α tubulin载体，第二阶段为构建GFP‑α tubulin‑mCherry通用型双价共表达载体；在第二阶段具体为：在第一阶段构建的GFP‑α tubulin载体的多克隆位点KpnI酶切位点处插入35S、mCherry、NOS序列，并在mCherry序列的5’端和3’端分别插入单一核酸酶酶切位点，分别为XbaI、KpnI/Acc65I和AscI序列，获得通用型双价载体。本发明提供的通用性双价载体，能够同时表达两个目的基因，同时具有GFP和mCherry的荧光信号，能够快速、准确的鉴定转基因植株，便于阳性苗筛选，也可用于烟草瞬时表达实验，能够缩短实验周期，省时省力。
荧光蛋白标记微管结合通用型载体构建

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