[发明专利]用于测量配体与靶标蛋白质的结合和细胞接合的方法在审
| 申请号： | 201680054321.7 | 申请日： | 2016-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN108368535A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | D.K.特赖伯;E.梅尼凯利 | 申请（专利权）人： | 欧陆迪斯卡沃爱克斯公司 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34;C12Q1/48;G01N33/58;G01N33/68;C07K19/00;C12N9/10;C12N9/12;C12N9/14;C12N9/40 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 张晓飞;余晓文 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 公开了用于检测和定量测量化合物与靶标大分子的结合性质的方法，其中所述靶标大分子经受变性并且与诸如酶短片段的标记肽连接。所述方法使用流体混合物，所述流体混合物包含(i)嵌合分子，其包含与所述标记肽连接的靶标大分子的，其中所述靶标大分子可以是由完整活细胞表达并且在完整活细胞内的嵌合蛋白，和(ii)其与所述靶标大分子结合经测量的化合物，其中所述靶标大分子经受变性。在允许化合物(例如所述靶标大分子的小分子抑制剂)结合之后，例如通过酶片段互补检测来自所述标记肽的信号。该信号指示变性和未变性靶标大分子之间的差异，并且由此分别指示未与所述化合物结合的靶标大分子和与所述化合物结合的靶标大分子之间的差异。 | ||
| 搜索关键词： | 靶标大分子 变性 标记肽 化合物结合 流体混合物 活细胞 小分子抑制剂 靶标蛋白质 测量配体 定量测量 方法使用 结合性质 嵌合蛋白 嵌合分子 细胞接合 信号指示 酶片段 检测 短片 测量 | ||
【主权项】：
1.一种用于测量化合物与靶标大分子之间的结合的方法，其包括：(a)制备流体混合物，所述流体混合物包含(i)表达嵌合蛋白的完整活细胞，所述嵌合蛋白包含与标记肽连接的靶标大分子，和(ii)其与所述靶标大分子结合经测量的化合物，其中所述靶标大分子经受变性；(b)在允许所述化合物与所述靶标大分子结合的条件下孵育步骤(a)的所述流体混合物；(c)在步骤(b)中孵育后，在产生(i)未与所述化合物结合的变性嵌合分子和(ii)与所述化合物结合的非变性嵌合分子的组合混合物的条件下，使所述流体混合物中的靶标大分子变性；(d)使步骤(c)的所述组合混合物与结合至所述标记肽的第二标记接触以形成复合物，其中所述复合物在(i)未与所述化合物结合的变性嵌合分子的情况下比在(ii)与所述化合物结合的非变性嵌合分子的情况下形成更少；和(e)检测步骤(d)中的所述复合物以产生指示化合物与靶标大分子之间结合的测量值的信号。
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- 张志毅 - 广东菲鹏生物有限公司
- 2018-10-19 - 2019-01-25 - C12Q1/34
- 本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种检测核酸内切酶存在的方法，该方法包括：将待检测样品与闭合环状DNA共孵育，并使用核酸外切酶对共孵育产物进行酶切；通过电泳带型差异判断所述核酸外切酶能否酶切所述共孵育产物，若能够酶切，则所述待检测样品含有核酸内切酶。该方法用于判断核酸内切酶污染的时候，结果准确，耗时短，易于实施。
- 一种DNase I活性比色检测法-201811297940.6
- 宋婵;丁炜;姚玥玮;姚成 - 南京工业大学
- 2018-11-02 - 2019-01-15 - C12Q1/34
- 本发明公开了一种基于DNA调节MIL‑53(Fe)过氧化物酶活性的脱氧核糖核酸酶I(Deoxyribonuclease I，DNase I)活性比色检测法。本发明使用价格低廉的3,3',5,5'‑四甲基联苯胺(TMB)为比色底物，基于ssDNA可有效调节MIL‑53(Fe)过氧化物酶活性的特性，利用DNase I对ssDNA的水解作用，构建了可实现裸眼观测DNase I活性的生物传感器。发展出一种具有成本低、操作简单、方便快捷等优点的比色分析法。本方法灵敏度高、稳定性好，适宜推广应用。
- 一种用于检测人体体液异质性增生细胞的联检试剂瓶和联检试剂盒-201710127827.2
- 温鹏 - 山东瓦博格生物技术有限公司
- 2017-03-06 - 2019-01-08 - C12Q1/34
- 本发明公开了一种用于检测人体体液异质性增生细胞的联检试剂瓶和联检试剂盒，涉及液体活检病理学检测技术领域。本发明公开的用于检测人体体液异质性增生细胞的联检试剂瓶包括瓶体，瓶体上设置有用于检测原血红素的原血红素检测部和用于检测β‑葡萄糖醛酸苷酶的β‑葡萄糖醛酸苷酶检测部。可同时对原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶进行检测，二者均是人体体液内异质性增生细胞的标志物，通过联检的方式，将这两种标志物同时检测，作为联合标志物，用于判断人体体液样本中细胞异质性增生的情况，其具有更高的灵敏度和特异性。
- 一种腺苷脱氨酶活性测定方法及腺苷脱氨酶检测试剂盒-201710489359.3
- 李丰盛;陈壮永 - 浙江亚培生物技术有限公司
- 2017-06-24 - 2019-01-01 - C12Q1/34
- 本发明涉及一种测定腺苷脱氨酶活性的方法，同时本发明还涉及腺苷脱氨酶检测试剂盒，属于医学检验测定技术领域。该方法以腺苷为底物，以嘌呤核苷酸磷酸化酶、黄嘌呤脱氢酶为工具酶，使底物转化并脱氢，再还原氧化型辅酶生成还原型辅酶，在波长340nmnm下检测还原型辅酶Ⅰ生成量，来计算酶反应速率。本发明反应步骤少，使用原料种类少，试剂稳定性好，好线性范围宽，灵敏度高，准确度好，便于推广。
- 一种基于单个量子点水平检测DNA糖基化酶活性的方法-201610150395.2
- 张春阳;唐波;王黎娟;马飞 - 山东师范大学
- 2016-03-16 - 2018-10-26 - C12Q1/34
- 本发明公开了一种基于单个量子点水平检测DNA糖基化酶活性的方法。检测时，DNA糖基化酶hOGG1会特异性识别并切除损伤鸟嘌呤，留下一个脱碱基位点，脱嘌呤核酸内切酶‑1会对脱碱基位点进一步剪切，留下一个核苷酸的缺口，DNA聚合酶β将Cy5‑dGTP聚合在该缺口处，生成双标记的双链核苷酸底物，通过生物素与链霉亲合素之间的特异性反应，DNA底物会结合在覆盖有链霉亲合素的量子点的表面，形成QD‑DNA‑Cy5复合物，空间距离缩小，导致量子点和Cy5之间发生荧光共振能量转移，从而可以在单分子水平观察到Cy5的荧光信号。本发明所述检测方法简单、快速、灵敏，检测下限可达1.8×10‑6U/μL。
- 一种N-糖酰胺酶的酶活力测定方法-201710232811.8
- 王婷;约瑟夫.弗戈迈尔;刘丽 - 南京农业大学
- 2017-04-11 - 2018-10-23 - C12Q1/34
- 本发明公开了一种N‑糖酰胺酶活力测定的方法，包括如下步骤：(1)还原糖标准曲线的制备，(2)N‑糖酰胺酶水解糖蛋白底物反应，(3)N‑糖酰胺酶水解糖蛋白产物测定；并进一步优化了显色条件。本发明所公开的方法准确度高、重复性强、操作简便、适用于大规模筛选N‑糖酰胺酶的活性。
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