[发明专利]一种用于分析野生大豆种质遗传完整性的方法

摘要

本发明提供一种用于分析野生大豆种质遗传完整性的方法，采用形态标记分析与SSR标记分析相结合：对野生大豆不同生活力群体及其后代群体单株进行形态性状调查，计算出形态多样性指数，并进行显著性差异分析；利用20对SSR核心引物组对各群体单株的DNA进行扩增检测，计算出不同生活力群体及其后代群体与对照群体之间的各位点等位基因频率、每位点等位基因数、遗传多样性指数和香农指数，并进行显著性差异分析。所述形态标记分析与SSR标记分析在同一群体同一单株上进行。本发明为全面、准确、高效地分析评价野生大豆在贮存及繁殖更新过程中遗传完整性变化提供标准并提出适合的更新发芽率阈值。

主权项

1.一种用于分析野生大豆种质遗传完整性的方法，其特征是，采用形态标记分析与SSR标记分析相结合：对野生大豆不同生活力群体及其后代群体单株进行农艺性状调查，计算出形态多样性指数，并进行显著性差异分析；利用SSR核心引物组对各群体单株的DNA进行扩增检测，计算出不同生活力群体及其后代群体与对照群体之间的各位点等位基因频率、每位点等位基因数、遗传多样性指数和香农指数，并进行显著性差异分析，对各处理群体与对照群体之间的各位点等位基因频率进行χ²检验，对每位点等位基因数、遗传多样性指数和香农指数进行显著性t检验；所述形态标记分析与SSR标记分析在同一群体同一单株上进行；所述SSR标记分析的分析样本的采集是在不同生活力亲代群体及其子代群体在田间繁殖更新期间，子代采集叶片的单株与其亲代是一一对应关系；所述SSR核心引物组由20个引物对组成：序列分别如SEQ ID No.1‑SEQ ID No.40所示；所述不同生活力群体的获得方法是采用人工倒序老化的方法，包括如下步骤：选取播种、田间管理、收获及成熟度一致的崂山野生大豆种子；用布袋包裹野生大豆种子，放入液氮中浸泡4分钟，然后将种子取出来在室温25℃下使其自然升温，破除崂山野生大豆硬实；将破除硬实后的野生大豆放入人工气候箱中进行种子含水量平衡，平衡条件是45％RH，26℃，30天，使处理种子的含水量处于同一水平；然后用铝箔袋真空密封分装，放置于人工老化箱内40℃恒温老化；放置顺序采用倒序法，即人工老化时间最长的处理先放入进行老化，人工老化时间最短的最后放入进行老化，试验结束时一起取出；人工老化结束后在25℃下，将所有处理密封平衡2天。