[发明专利]一种全细胞生物催化生产戊二酸的方法

摘要

本发明公开了一种全细胞生物催化生产戊二酸的方法。该方法先诱导表达并收集重组菌株E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞和E.coli28LGOX的细胞，再将重组菌E.coli28LGOX的细胞和重组菌E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞按1：1‑5混合后加入底物L‑赖氨酸和L‑谷氨酸，使L‑谷氨酸与L‑赖氨酸的摩尔比为1：0.5‑4，加入表面活性剂，全细胞催化生产戊二酸。本发明方法无需添加2‑酮戊二酸，降低了生产成本，解决了发酵法生产周期长，代谢产物复杂，底物转化率低，产物分离提取困难，及能耗高的问题，也解决了酶法催化中级联催化过程不易实现的不足，提高催化效率，同时省了酶纯化过程。

主权项

1.一种全细胞生物催化生产戊二酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，构建过表达DavBA和gabDT的菌株E.coliBL‑22AB‑YDT，然后从平板上挑取重组菌株E.coliBL‑22AB‑YDT的单菌落接种到含有100mg/L氨苄青霉素抗性和35mg/L氯霉素抗性的5ml LB摇管里，培养6‑8h后转接到含有100mg/L氨苄青霉素抗性和35mg/L氯霉素抗性的100MLLB培养基里，培养至OD₆₀₀＝0.6‑0.8，离心集菌，得到重组菌株E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞；步骤2，构建过表达LGOX的菌株E.coli28LGOX，然后从平板上挑取重组菌株E.coli28LGOX的单菌落接种到含卡那霉素抗性及LB的摇管里，培养6‑8h后转接到含有卡那霉素抗性及LB的摇瓶里，培养至OD₆₀₀＝0.6‑0.8，离心集菌，得到重组菌株E.coli28LGOX的细胞；步骤3，将重组菌E.coli28LGOX的细胞和重组菌E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞按照比例1：1‑5混合，加入底物L‑赖氨酸和L‑谷氨酸，使L‑谷氨酸与L‑赖氨酸的摩尔比为1：0.5‑4，加入表面活性剂，全细胞催化生产戊二酸；步骤3中重组菌E.coli28LGOX的细胞和重组菌E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞按照比例1：5混合；所述的底物L‑谷氨酸和底物L‑赖氨酸的摩尔比1：2。