[发明专利]一种向半滑舌鳎垂体细胞添加维生素 E 后提高促性腺激素表达水平的方法有效
| 申请号： | 201610237755.2 | 申请日： | 2016-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN105838663B | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 王娜;王蔚芳;黄滨;史宝;王若青;马佳璐;陈松林 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 50219 重庆百润洪知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘立春<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 266071 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种向半滑舌鳎垂体细胞添加维生素E后提高促性腺激素表达水平的方法，步骤如下：(1)半滑舌鳎垂体细胞的分离与培养：首先配制L‑15细胞培养基，然后用所配培养基进行原代细胞的培养：(2)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E：配制维生素E溶液，向步骤(1)中所培养的细胞中添加维生素E，在添加后第四天进行样品收集；(3)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的定量PCR分析；取步骤(2)中的细胞沉淀进行RNA的提取及反转录，然后进行实时荧光定量PCR反应；(4)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的ELISA分析；以步骤(2)中收集的上清液为材料依次进行标准品的稀释与加样、加样、温育、配液、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止、测定。 | ||
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【主权项】：
1.一种向半滑舌鳎垂体细胞添加维生素E后提高促性腺激素表达水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)半滑舌鳎垂体细胞的分离与培养：首先取9.6克L-15培养基和4.76克Hepes，充分溶解混匀4小时后，用NaOH调节pH值，然后抽滤，分装后进行保存；在加入胎牛血清、青霉素、链霉素以后，即为L-15完全培养基，然后进行保存，最后用所配培养基将原代细胞在24℃的培养；/n(2)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E：配制低浓度为70μmol/ml和高浓度为210μmol/ml维生素E溶液，将前述两个浓度的维生素E分别加入到两份步骤(1)中所培养的细胞中，在添加后第四天进行样品收集；/n(3)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的定量PCR分析：取步骤(2)中的细胞沉淀进行RNA的提取及反转录，然后进行实时荧光定量PCR反应；/n(4)向半滑舌鳎垂体细胞中添加维生素E后FSH和LH的ELISA分析：以步骤(2)中收集的上清液为材料依次进行标准品的稀释与加样、加样、温育30分钟、配液、洗涤、加酶标试剂50μl、温育、洗涤、显色15分钟、终止、测定；/n步骤(1)中的PH为7.4，保存温度为4℃，胎牛血清的终体积为5％、青霉素的终浓度为100U/ml、链霉素的终浓度为100μg/ml。/n
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- 本发明涉及一种放射性肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用，所述放射性肺损伤体外细胞模型是由以下方法构建：采用6MV X射线10Gy单次照射A549细胞，剂量率为2Gy/min，并在照射后继续培养第12h‑24h内检测放射性肺损伤相关指标。本发明还包括所述放射性肺损伤体外细胞模型在制备治疗/预防放射性肺损伤的药物及其致病机制中的应用。其优点表现在：克服了现有技术存在的缺陷：造模周期过长(通常需6个月以上)，且受到实验动物个体影响较大，可重复性低，在细胞机制方面的研究性价比低等。本发明的构建方法为放射性肺损伤机制研究以及治疗药物的研发提供了重要的研究技术支持，具有很好的应用前景。
- 一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基-201910900405.3
- 齐智;孟丹丹;刘海英;房圆瑗 - 山东甲骨文生物科技有限公司
- 2019-09-23 - 2019-12-27 - C12N5/071
- 本发明公开了一种用于Vero细胞培养及相应病毒生产的低血清培养基，包括以下组成成分：氨基酸、维生素、无机盐类、蛋白质和辅助成分，所述氨基酸包括甘氨酸、盐酸精氨酸、谷氨酰胺、盐酸赖氨酸、丝氨酸、酪氨酸二钠盐二水合物、缬氨酸；所述蛋白质包括全组分白蛋白、水解乳蛋白(LAH)、饱和铁人转铁蛋白、全链重组胰岛素、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)；本发明制备的培养基在用于Vero细胞扩增猪流行性腹泻病毒的疫苗生产中，配方成分简单，成本低廉且易获取，有效提升细胞的培养效果的同时保持细胞良好的生长状态。
- 一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法-201710038732.3
- 孟庆雪;张怡;刘艳青 - 天晴干细胞股份有限公司
- 2017-01-19 - 2019-12-27 - C12N5/071
- 一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法，它涉及一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法。本发明的目的是提供一种不同来源的间充质干细胞向胰岛样细胞分化的方法，进而获得大量的胰岛样细胞。为实现上述目标，具体方法如下：1)脐带、胎盘或脂肪来源间充质干细胞的分离及原代培养；2)分化培养基的制备包括：制备脑组织条件培养基(BTCM)、细胞分化诱导液以及干细胞条件培养基(SCM)；3)三阶段诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化；4)获得的胰岛样细胞的鉴定。通过本方法获得胰岛样细胞成熟度高，较少的细胞数量即可达到快速降糖作用，具有广阔的应用前景，本发明应用于生物医学领域。
- 一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基-201910745727.5
- 贾萌萌;潘韵芝;胡悦;朱国强;李威 - 苏州易迈吉生物医药科技有限公司
- 2019-08-13 - 2019-12-20 - C12N5/071
- 本发明提供一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，涉及生物培养领域，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物，本发明所提供的培养基化学成分明确，安全性高，污染风险小，能适用于多种不同BHK细胞株生长，细胞培养效果好，有利于下游分离和纯化，培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均为已知的化学结构，能够支持细胞生长和稳定传代的无血清培养基，可适用于工业规模生产。
- 一种鸡肠上皮细胞分离培养方法-201510137707.1
- 胡耀东;陆路;兰丹;黄秀;刘益平;李地艳;朱庆;周宇光;竭航 - 四川农业大学
- 2015-03-26 - 2019-12-20 - C12N5/071
- 本发明涉及一种鸡肠上皮细胞分离培养方法，所述方法包括以下步骤：步骤1：用蛋白酶对鸡胚肠组织块进行消化，获得消化产物；步骤2：用细胞筛对所述消化产物进行过滤，收集尺寸为100‑500目的细胞团块；步骤3：将所述细胞团块在800‑1500r/min下离心5‑15min，收集细胞沉淀。本发明还提供了利用本发明所述的方法获得的鸡肠上皮细胞。本发明所提供的方法能够大大缩短试验时间，节约试剂，提高分离的肠上皮细胞的纯度。
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