[发明专利]一种谷氨酰胺酰基环化酶的制备方法在审
| 申请号： | 201510319520.3 | 申请日： | 2015-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN104946609A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 吴海强;李满满;郑易之;邹永东;贺震旦;刘志刚;董瑶;徐迪宗 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/70 |
| 代理公司： | 深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙) 44312 | 代理人： | 陈健 |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种谷氨酰胺酰基环化酶的制备方法，将可用于表达QC33-361的重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，获得可合成QC33-361的基因工程菌；将基因工程菌接种到含有抗性标记的LB培养基中，诱导表达；诱导表达结束后，收集含有QC33-361的融合蛋白；对含有QC33-361的融合蛋白进行PPE酶，脱盐，分子筛柱层析纯化，分离出QC33-361蛋白。合成得到的QC33-361为具有显著催化底物分子内谷氨酰胺酰基环化反应的活性。合成得到的QC33-361可用于QC抑制剂、激动剂的、拮抗剂等筛选发现、QC相关作用机制研究、QC检测相关试剂盒的开发、QC高表达相关疾病的检测诊断等。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 谷氨酰胺 环化酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种谷氨酰胺酰基环化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a、将可用于表达QC33‑361的重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，获得可合成QC33‑361的基因工程菌；b、将基因工程菌接种到含有抗性标记的LB培养基中，诱导表达；c、诱导表达结束后，收集菌体，溶菌、高压破碎菌体，离心分离，取上清液进行亲和层析进行纯化，收集含有QC33‑361的融合蛋白；d、对含有QC33‑361的融合蛋白进行PPE酶，脱盐，分子筛柱层析纯化，分离出QC 33‑361蛋白。
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- 高海燕;周迎卓;甄超颖;王珂 - 上海大学
- 2019-06-04 - 2019-08-30 - C12N9/10
- 本发明公开了一种通过发酵工艺制备具有抑菌作用的γ‑谷胺酰转肽酶的方法，以该菌株为出发菌株，包括以下步骤：取液体培养基置于三角瓶中，按1‑10％v/v的接种量接入菌体种子，进行摇瓶发酵，发酵条件为20‑40℃，100‑300rpm，发酵培养48h后，将发酵液离心去除菌体，取上清液用硫酸铵盐析法纯化，即得γ‑谷胺酰转肽酶，所述液体培养基包括麦芽糖、玉米粉、酵母膏和无机盐，所述无机盐浓度比为1：5‑5：1的MgSO4·7H2O和K2HPO4·3H2O混合物。该发酵工艺方法通过优化培养基种类和浓度，获得了较高活性和抑菌作用的γ‑谷胺酰转肽酶。该制备工艺简单、条件易控制,适合工业化生产。
- 一种氨基葡萄糖-6磷酸合成酶突变体-201910439470.0
- 刘龙;陈坚;堵国成;宋阳;顾洋;李江华;赵雅雯 - 江南大学
- 2016-09-29 - 2019-08-23 - C12N9/10
- 本发明公开了一种氨基葡萄糖‑6磷酸合成酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明采用定点饱和突变氨基葡萄糖‑6‑磷酸合成酶的方法提供了来源于E.coli的氨基葡萄糖‑6‑磷酸合成酶突变体。相比野生型氨基葡萄糖‑6‑磷酸转移酶，突变体对6‑磷酸果糖的催化活力明显提高，乙酰氨基葡萄糖的产量更高，更适合工业化生产。
- 一种氨基葡萄糖-6磷酸合成酶突变体-201910439712.6
- 刘龙;陈坚;堵国成;宋阳;顾洋;李江华;赵雅雯 - 江南大学
- 2016-09-29 - 2019-08-23 - C12N9/10
- 本发明公开了一种氨基葡萄糖‑6磷酸合成酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明采用定点饱和突变氨基葡萄糖‑6‑磷酸合成酶的方法提供了来源于E.coli的氨基葡萄糖‑6‑磷酸合成酶突变体。相比野生型氨基葡萄糖‑6‑磷酸转移酶，突变体对6‑磷酸果糖的催化活力明显提高，乙酰氨基葡萄糖的产量更高，更适合工业化生产。
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