[发明专利]顺式环氧琥珀酸水解酶的固定化方法及其固定化酶在审
| 申请号： | 201410098975.2 | 申请日： | 2014-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN103882000A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 王云山;王自强;李彦良;苏志国 | 申请（专利权）人： | 中国科学院过程工程研究所 |
| 主分类号： | C12N11/12 | 分类号： | C12N11/12;C12N11/10;C12N9/14;C12N15/70;C12P7/46 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋;侯桂丽 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种顺式环氧琥珀酸水解酶的固定化方法。该固定化方法通过将组氨酸标签与顺式环氧琥珀酸水解酶进行融合表达，利用组氨酸咪唑基与亲和层析介质中的金属离子Ni2+之间的相互作用，实现了顺式环氧琥珀酸水解酶在亲和层析介质上的固定化；该固定化方法的酶活性收率高，所得固定化酶稳定性好、催化效率高，并且省略了酶的分离纯化步骤，操作简单。 | ||
| 搜索关键词： | 顺式 琥珀酸 水解 固定 方法 及其 | ||
【主权项】：
一种顺式环氧琥珀酸水解酶的固定化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将顺式环氧琥珀酸水解酶基因的N末端或C末端与组氨酸标签连接，构建二者的融合表达载体；（2）将步骤（1）所得融合表达载体转化工程菌，获得重组工程菌；（3）将步骤（2）所得重组工程菌进行培养及诱导表达，得重组表达工程菌；（4）收集重组表达工程菌，并进行菌体破碎，固液分离，收集上清液；（5）步骤（4）所得上清液经过Ni2+螯合层析介质进行螯合反应，即得固定化顺式环氧琥珀酸水解酶。
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- 曾宪卓;鲁菲 - 深圳爱生再生医学科技有限公司
- 2015-10-15 - 2016-01-06 - C12N11/12
- 本发明提供了一种脱乙酰几丁质/羧甲基纤维素干细胞微囊及其制备和培养方法，制备方法包括：将羧甲基纤维素用质量体积分数1～2％的醋酸分散后，加入至CaCl2溶液中进行凝胶化，形成羧甲基纤维素凝胶；将脱乙酰几丁质用醋酸盐缓冲液分散后，再加入待培养的干细胞，制成脱乙酰几丁质和细胞的混合悬液；将混合悬液加入至羧甲基纤维素凝胶中进行凝聚交联，并将凝聚交联后的得到微囊用柠檬酸钠溶液进行浸泡处理。相比聚赖氨酸/海藻酸钠细胞培养微囊，本发明包膜结构在电荷静电吸附结合的基础上，再借助于脱乙酰基、醚键修饰产生的活性集团，能够形成更加复杂的分子结构，使包膜内具有更加稳定的细胞生长环境，从而提升细胞培养的效率。
- 一种消除底物毒性的方法-201310682483.3
- 刘春巧;王芳;张鹏 - 北京化工大学
- 2013-12-16 - 2015-06-17 - C12N11/12
- 本发明涉及利用固定化载体对有毒底物进行固定化，然后用固定化底物替代传统的游离底物进行反应可有效消除底物对催化剂的毒害作用，大幅度提高目的产物产量的方法。它包括固定化载体的选择，固定化底物的制备，反应条件优化，产物分离纯化和固定化载体的回收及循环使用等工艺步骤。采用本发明可有效消除底物对生物催化剂的毒害作用，提高了催化剂对有毒底物的耐受度，延长了催化剂的使用寿命，简化了后续产物分离纯化工艺，并减少了生产过程中有毒废水的排放；具有产量高、生产工艺简单、催化剂使用寿命长、环境友好等优点，大大降低了目的产物生产成本，为实现底物对生物催化剂具有毒害作用的目的产物的大规模低成本生产奠定了基础。
- 一种固定化纤维素酶制备的方法-201510039925.1
- 孙树坤;陈昊;解桂东;胡立志;于殿宇;王喜泉;许慧;郑环宇;朱秀清;姚磊 - 黑龙江省大豆技术开发研究中心
- 2015-01-27 - 2015-05-13 - C12N11/12
- 本发明涉及一种固定化纤维素酶制备的方法。由于游离酶混溶在反应体系中不仅不易分离回收，难以反复或连续使用，因此，将游离的纤维素酶进行固定化。将醋酸纤维素酶固定在不同孔径的聚丙烯复合膜上，通过电镜扫描观察酶固定在复合膜的效果，选出最佳孔径的聚丙烯复合膜，将选出的最佳复合酶膜固定在辊上。本发明对游离的纤维素酶进行固定化的条件选择戊二醛浓度为0.45~0.55%时，固定化温度48~49℃，选择固定化pH为3.9~4.0，交联时间为3~4h，吸附时间为3.0~3.1h，纤维素酶浓度为1.0~2.0%。测定游离纤维素酶的活力为5.103U/cm2，将固定化纤维素酶辊连续碾压大豆胚片24h，结果酶活力仍保持在80%左右，得到的固定化纤维素酶活力为4.732U/cm2。
- 一种合成甘油二酯的催化膜制备方法制备及其制备甘油二酯的方法-201410750067.7
- 徐梅 - 徐梅
- 2014-12-10 - 2015-05-13 - C12N11/12
- 一种合成甘油二酯的催化膜制备方法制备及其制备甘油二酯的方法，属于甘油二酯制备领域。提供一种合成甘油二酯的催化膜制备方法及利用催化膜制备甘油二酯的方法。所述方法通过复合膜的制备和脂肪酶的固定化两步骤得到催化膜，同时以大豆油和甘油为原料，在超临界状态下利用CO2和制备的催化膜制备出甘油二酯。采用该方法制备的催化剂，其酶活力为17.2U/cm2，在超临界状态下合成甘油二酯，最终得到的反应产物中甘油二酯的质量分数为66.3%，具有良好应用前景。
- 一种植物乳杆菌微胶囊的制备方法-201410516378.7
- 王连民;刘珂飞;郗宏波 - 天津生机集团股份有限公司
- 2014-09-30 - 2015-04-29 - C12N11/12
- 本发明公开了一种植物乳杆菌微胶囊的制备方法。本发明按照下述步骤进行：植物乳杆菌的菌泥与保护壁材溶液以质量比1：3～1：5的比例均匀混合制成菌悬液；所述保护壁材溶液由预糊化变性淀粉、麦芽糊精、蔗糖、微晶纤维素和水组成；菌悬液通过喷雾干燥机得到植物乳杆菌微胶囊。本发明保护壁材制备的植物乳杆菌微胶囊中活菌量达90%，在贮存12个月后存活率仍高于75%；保护壁材成本低廉，成本远低于现有同类产品；水溶性好，方便应用。在食品、医药以及饲料领域具有非常好的应用潜力。
- 一种用于微纳颗粒对细胞影响实验的微反应器的制备方法-201410767863.1
- 屈树新;刘玉梅;匙峰;高雪玲;刘阳;翁杰 - 西南交通大学
- 2014-12-12 - 2015-04-08 - C12N11/12
- 一种用于微纳颗粒对细胞影响实验的微反应器的制备方法，步骤是：(A)将细胞、微纳颗粒充分混匀于聚阴离子等渗溶液中形成混合液；(B)用静电微注射仪将混合液滴入盛有二价阳离子等渗溶液的收集池，得到包裹细胞和微纳颗粒的凝胶微球；(C)将B步的凝胶微球投入聚阳离子等渗溶液中，形成一层聚阳离子包覆膜；随后投入聚阴离子等渗溶液中振荡再形成一层聚阴离子包覆膜；重复操作0-3次，得到具有2-8层包覆膜的凝胶微球；(D)将(C)步的凝胶微球投入二价阳离子的等渗置换液，即获得用于微纳颗粒对细胞影响实验的微反应器。该微反应器使细胞-微纳颗粒充分接触，细胞、微纳颗粒的计量准确，能更准确、可靠地反映微纳颗粒对细胞的影响作用关系。
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