[发明专利]一种大豆糖蜜发酵生产柠檬酸的方法

摘要

本发明涉及一种大豆糖蜜发酵生产柠檬酸的方法，该方法以大豆糖蜜作为唯一碳源，再添加所需的培养基，采用黑曲霉菌发酵生产柠檬酸；采用大豆糖蜜质量浓度26%，发酵温度35℃，起始pH4.5，发酵时间96h，接种量5%，在此条件下，大豆糖蜜发酵柠檬酸得到的总酸度为9.02%。本发明选用大豆糖蜜发酵生产柠檬酸，充分利用了大豆糖蜜这一宝贵资源，对其开发和利用，一方面可减轻对环境压力，另一方面也可以大大提高大豆糖蜜的利用价值，变废为宝。另外由于大豆糖蜜价格低廉，采用其作为发酵底物可以明显降低生产成本。

主权项

一种大豆糖蜜发酵生产柠檬酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）培养基的制备菌种活化培养基的制备：取去皮土豆加蒸馏水煮沸25‑35 min，土豆与蒸馏水的比例为：1g：3.8‑4.2 mL，过滤，取滤液，按1g土豆加入0.1‑0.15g葡萄糖和0.09‑0.095g琼脂计加入葡萄糖和琼脂，用蒸馏水定容，土豆与定容后溶液的比例为：1g：4.8‑5.2 mL，灭菌后铺斜面，制备成斜面培养基备用；种子培养基的制备：取55‑65g/L的大豆糖蜜溶液，按1mL大豆糖蜜溶液加入0.05‑0.06g葡萄糖计加入葡萄糖，用蒸馏水定容，大豆糖蜜溶液与定容后溶液的体积比为：1：1.9‑2.1，灭菌后冷却备用；发酵培养基的制备：调节大豆糖蜜初糖质量浓度为23‑28%，加入新制配的石灰乳调pH8.8‑9.2，加热煮沸，过滤，滤液用硫酸回调至pH5.8‑6.2，再加草酸除去多余的Ca2+,在2500‑3500 r/min的转速下离心分离15‑25 min，取上清液，按1mL上清液加入0.005‑0.006gKH2PO4和0.01‑0.015尿素计，先加入KH2PO4，灭菌后，再加入尿素，再在无菌操作条件下利用盐酸或者氢氧化钠溶液调节pH4.3‑4.8，冷却备用；（2）菌种活化：以无菌操作方式用接种环取一环的黑曲霉菌菌种到菌种活化培养基中划斜面，放在28‑33℃恒温培养65‑80 h后，用无菌水将斜面上的孢子洗下制备孢子悬浊液，利用无菌水调节孢子悬浊液中孢子浓度0.8×106‑1.2×106spore/mL；（3）种子培养：取孢子悬浮液接入种子培养基中，孢子悬浮液与种子培养基的体积比为：1：45‑55，于32‑38℃、150‑250 r/min的摇床中培养35‑45h得种子发酵液；（4）糖蜜发酵产柠檬酸：按4‑6％的接种量将种子发酵液接种到发酵培养基中，将接种好的培养基放到32‑38℃、150‑250 r/min的摇床上培养90‑100h。