[发明专利]聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体无效
| 申请号： | 200810062516.3 | 申请日： | 2008-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN101602801A | 公开（公告）日： | 2009-12-16 |
| 发明（设计）人： | 金荣;徐飞虎;王同映;刘晓妮;王昌梅;单剑峰;朱琳;方井晋;汪军远;戎亚雯 | 申请（专利权）人： | 杭州九源基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/535 | 分类号： | C07K14/535;C07K1/107;A61K38/19;A61P7/00 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 | 代理人： | 徐关寿 |
| 地址： | 310018浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)的制备和鉴定。通过点突变技术，将重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)18位的半胱氨酸(cys)突变为丝氨酸(ser)，再通过噬菌体展示技术表达N端突变的重组人粒细胞集落刺激因子(其中18位的半胱氨酸已突变为丝氨酸)，然后利用重组人粒细胞集落刺激因子受体筛选出具有高稳定性和生物学活性的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)。突变后的rmhG-CSF与带有氨基反应基团的聚乙二醇(PEG)反应，经分离纯化，获得了活性和稳定性更高的聚乙二醇单修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)。 | ||
| 搜索关键词： | 聚乙二醇 修饰 重组 粒细胞 集落刺激因子 突变体 | ||
【主权项】：
1、一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体，其特征在于：(1)所述的重组人粒细胞集落刺激因子突变体氨基酸序列与Seq ID No.1-SeqID No.21任一项所示的氨基酸序列相同；(2)所述的聚乙二醇为带有氨基反应基团的聚乙二醇分子，其定点结合于重组人粒细胞集落刺激因子突变体蛋白序列中的α-氨基或ε-氨基。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于杭州九源基因工程有限公司，未经杭州九源基因工程有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200810062516.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种生物酶内墙环保涂料
- 下一篇：一种2-氰基-3,6-二氯吡啶的合成方法
- 同类专利
- 一种鸡GM-CSF蛋白、其单克隆抗体、其制备方法和应用-201910314507.7
- 任广彩;陈瑞爱;黄妙容;李延鹏;罗琼;张文炎;刘之文 - 肇庆大华农生物药品有限公司;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司
- 2019-04-18 - 2019-09-24 - C07K14/535
- 本发明一种鸡GM‑CSF蛋白、其单克隆抗体、其制备方法和应用，属于基因工程技术领域。所述鸡GM‑CSF蛋白制备方法包括下述步骤：合成SEQ ID NO.1所示基因序列；制备原核表达载体pGEX‑4T‑1‑GM‑CSF；原核表达载体pGEX‑4T‑1‑GM‑CSF诱导表达鸡GM‑CSF蛋白；纯化得到鸡GM‑CSF蛋白。本发明具有以下优点：化学合成GM‑CSF基因，基因合成无需模板，因而不受基因来源限制，更经济、简便、省时省力；以原核表达系统作为表达载体，具有节省成本、产量高、可大规模制备的优点。
- 植物生产口服重组人粒细胞集落刺激因子-201910549692.8
- 王跃驹;陈书元;张月恒 - 王跃驹
- 2019-06-24 - 2019-09-10 - C07K14/535
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及植物生产口服重组人粒细胞集落刺激因子。本发明利用植物例如生菜作为重组蛋白质生产的有效表达平台，利用简单以及高效的表达体系生产生物活性物质。随后将生产该活性物质的叶片冻干制成胶囊。此胶囊可以在常温保存而保持生物活性。利用Western Blot蛋白杂交法确定降糖活性蛋白成功表达。生物活性测试结果表明利用该平台技术生产的重组人粒细胞集落刺激因子活性显著。
- 一种重组人粒细胞集落刺激因子的复性及纯化方法-201810038737.0
- 赵俊;孟凯特;张道平;张林;张瑜;王晓慧;李昕;孙中涛;方雅;文勇 - 江苏奥赛康药业股份有限公司
- 2018-01-16 - 2019-07-23 - C07K14/535
- 本发明提供了一种重组人粒细胞集落刺激因子的复性及纯化方法，包括：1）制备包涵体溶解液；2）将包涵体溶解液加入到复性缓冲液中，加入胱氨酸和半胱氨酸，进行复性；3）上样至复合配基的弱阳离子层析柱进行纯化。本发明纯化工艺操作简便、用时短，同时设备要求不高，节约成本，适合放大的生产规模，并且复性时包涵蛋白体浓度高、复性率高、层析纯化后蛋白纯度高。
- 猪GM‑CSF蛋白的制备方法及其注射液和应用-201710343196.8
- 钱泓;吴有强;张强;徐玉兰;闻雪;姜冰洁;白志军;查银河;江海 - 浙江海隆生物科技有限公司
- 2017-05-16 - 2017-09-22 - C07K14/535
- 本发明公开了一种猪GM‑CSF蛋白的制备方法及其注射液和应用，该方法包括以下步骤1)将密码子优化后的猪GM‑CSF基因序列克隆到原核表达质粒中，得到重组质粒；2)将步骤1)中重组质粒转化大肠杆菌，得到阳性克隆；3)将步骤2)中阳性克隆进行发酵，诱导表达含有伴侣蛋白及相应酶切位点的猪GM‑CSF重组融合蛋白，得到含有伴侣蛋白及相应酶切位点的猪GM‑CSF重组融合蛋白；4)纯化步骤3)中猪GM‑CSF重组融合蛋白；5)使用能够切开所述猪GM‑CSF重组融合蛋白中酶切位点的蛋白酶对纯化后的猪GM‑CSF重组融合蛋白进行酶切，得到酶切液；以及6)从步骤5)中的酶切液中纯化得到猪GM‑CSF蛋白。使用本发明的方法在制备猪GM‑CSF蛋白时具有产量高、易于纯化、成本低、适合大规模生产等优点，且本发明的注射液在治疗病猪时有非常好的疗效。
- 经修饰的牛G‑CSF多肽和其用途-201710155525.6
- 安娜-玛莉亚.A.海斯蒲楠;尼克.克努森;席雅.诺曼;爱伦.柯钦;瓦迪姆.克赖诺夫;莉莲.何;彼德.C.康宁 - AMBRX公司;美国礼来公司
- 2009-07-22 - 2017-07-07 - C07K14/535
- 本发明提供经修饰的牛G‑CSF多肽和其用途。
- 粒细胞巨噬细胞刺激因子及其制剂和应用-201610172455.0
- 金磊;王思勤;岳本亮;刘云杉 - 长春金赛药业有限责任公司
- 2016-03-24 - 2017-06-20 - C07K14/535
- 本发明属于蛋白质药物领域，涉及粒细胞巨噬细胞刺激因子，其适合用于预防宫腔粘连术后的复发并能提高妊娠率。另外，本发明还涉及GM‑CSF的药物制剂及其应用等。
- 纯化生长因子蛋白的方法-201610227557.8
- 古斯塔夫·吉尔加姆;斯特凡·温厄;马亚·蒂迈尔 - 奥克塔法马股份有限公司
- 2011-03-30 - 2016-08-17 - C07K14/535
- 一种在使用色谱的纯化顺序中纯化生长因子蛋白的方法，特征在于：‑至少一种色谱用多元树脂进行；‑所述生长因子蛋白在pH 4到6.2之间时结合至所述多元树脂，并且所述生长因子蛋白在pH＞6.3下洗脱，并且生长因子蛋白的洗脱通过向洗脱缓冲液加入精氨酸和/或NaCl来改进。‑多元树脂步骤随后是酵母源性亲和配体树脂步骤，这导致产物纯度＞90％。
- 一种聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的制备方法及其药物组合物-201410272925.1
- 陈庆财;文勇;鲍曼;张超;李文 - 江苏奥赛康药业股份有限公司
- 2014-06-18 - 2016-01-27 - C07K14/535
- 本发明提供一种制备聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的方法，包括如下步骤：(a)通过碱调节剂调节含有重组人粒细胞刺激因子的母液pH至第一pH；(b)母液中加入甲氧基-聚乙二醇-丙醛，搅拌溶解；(c)加入NaBH3CN，搅拌反应；(d)通过酸调节剂调节反应液pH至第二pH终止反应，得所述聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子。本发明的聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子的制备方法工艺简便，反应液的缓冲体系与重组人粒细胞刺激因子的母液的缓冲体系保持一致，省却了更换缓冲液的步骤且终止反应的方法为使用盐酸调节pH，降低了产品纯化的难度，从而易于工业化生产。且由于加入的试剂种类少，提高了产品在临床使用中的安全性。
- 重组蛋白质的衍生物、粒细胞集落刺激因子的同多聚体及其制备方法-201180072644.6
- 埃迪塔·米斯蒂涅内;乔纳斯·亨利卡斯·佩斯利亚卡斯;米尔达·普莱凯蒂特;金陶塔斯·兹维布利斯 - 普罗法尔马封闭式股份公司
- 2011-08-09 - 2014-04-09 - C07K14/535
- 本发明涉及重组蛋白质的衍生物(包含基因融合的重组生物活性蛋白质单体单元经选定接头部分连接的同多聚体)及其制备方法。重组蛋白质的衍生物优选是人粒细胞集落刺激因子的二聚体，特征在于体内循环时间增加。
- 一种粒细胞集落刺激因子与聚乙二醇的共轭物-201180044089.6
- 大菊阿纳·伟尼阿迷诺夫娜·茄尔锘夫斯卡娅;德迷特例·瓦连吉诺维奇·莫罗佐夫;列夫·阿列克三渡罗维奇·杰尼琐夫;耶列娜·吉尔吉耶夫娜·橹邓郭;耶列娜·列欧尼多夫娜·莫罗唑娃 - BIOCAD股份有限公司
- 2011-07-19 - 2013-06-05 - C07K14/535
- 本发明涉及药物制剂和药物，即，涉及具有通式(I)的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的新的生理活性的共轭物：
其中：n为681到1000的整数；m为≥4的整数；NαH-G-CSF为具有G-CSF活性的天然或重组多肽。本发明还涉及含有所要求的通式(I)共轭物的药物，药物组合物，通式(I)共轭物在以粒细胞集落刺激因子作为活性成分用于预防或/和治疗中性粒细胞减少症的药物中的应用，含有药物组合物的容器。
- 获得生物活性的重组人G-CSF的方法-201180014299.0
- 瓦尔特·因德雷尔;克里斯蒂安·舍克尔曼 - 百奥杰诺瑞克斯有限公司
- 2011-03-17 - 2013-01-23 - C07K14/535
- 本发明提供了从包含体获得生物活性的重组人G-CSF的方法，其中增溶和重折叠过程可以在环境温度下执行，并且纯化步骤包括反相色谱(RP)，特别是RP-HPLC。如此获得的G-CSF制备物的特征为高纯度和均质性。
- 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法-201110184390.9
- 王晶翼;孙丽霞;王克波;艾现伟;董婷;王希菊;张乐;王乐 - 齐鲁制药有限公司
- 2011-07-01 - 2013-01-02 - C07K14/535
- 本发明提供一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，本发明的发明人对各种层析方法进行了大量的研究，发现利用脱盐层析、离子交换串联层析和脱盐层析顺序组合纯化，能够获得高纯度的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子。本发明纯化工艺充分利用了目的蛋白在表面电荷和疏水性上的特点，先通过一个阴离子交换层析柱，有效的去除了内毒素，增加了工艺的可控性；第二步层析充分利用目的蛋白的强疏水性，实现了串联层析，将内毒素的去除和蛋白的纯化两个步骤合并为一个步骤。本工艺不仅可以有效去除内毒素，并且简化了操作步骤，节省了生产时间，提高了生产效率，十分适合大规模工业化放大生产。
- 重组人G-CSF二聚体在治疗神经损伤疾病中的用途-201010181623.5
- 严孝强;黄智华;杨红舟;孙乃超;黄予良 - 健能隆医药技术(上海)有限公司
- 2010-05-25 - 2011-11-30 - C07K14/535
- 本发明涉及重组人G-CSF二聚体在治疗神经损伤疾病中的用途。具体地，本发明通过使用重组人G-CSF二聚体分子，在动物体内缺血性神经损伤后，可以保护神经元，从而使损伤的神经功能得到恢复。本发明的二聚体G-CSF的血清半衰期延长，且生物活性增加，从而能够更有效地治疗神经损伤疾病。
- 重组人G-CSF的改进的加工-200980137913.5
- 卡罗拉·施罗德;伊丽莎白·卡萨特蒙特;彼得·索勒曼尼;迈克尔·莱纳尔 - 奥克塔法马生物制药股份有限公司
- 2009-10-02 - 2011-08-24 - C07K14/535
- 一种包括信号肽和G-CSF肽的G-CSF前体，其中，所述信号肽具有人G-CSF/b分子中的人野生型信号肽的序列，且该序列具有至少以下突变之一：Glu29的删除、Glu26的插入、Lys11Leu的取代、His21Phe的取代，以及Glu28Leu的取代。
- 粒细胞集落形成刺激因子(G-CSF)的突变体及其化学缀合多肽-201010605914.2
- 康官烨;洪晶云 - 牧岩生命工学研究所
- 2006-07-19 - 2011-08-17 - C07K14/535
- 本发明提供设计用于特异性化学缀合的人粒细胞集落形成刺激因子(G-CSF)的突变体及其化学缀合物，其作为佐剂在癌症治疗中使用。本发明提供G-CSF的突变体，其中G-CSF位置133处的苏氨酸(Thr)残基被半胱氨酸(Cys)残基取代，其中所述G-CSF包括SEQ ID NO：1中所确定的氨基酸序列。另外，本发明提供G-CSF的突变体，其中半胱氨酸(Cys)残基被插入到G-CSF的位置135处的甘氨酸(Gly)残基和位置136处的丙氨酸(Ala)残基之间。进一步，本发明提供化学缀合的突变G-CSF，在其半胱氨酸残基处连接了生物适合聚合物，如聚乙二醇(PEG)，所述半胱氨酸残基是通过取代或插入突变引入的，其由于与生物适合聚合物的缀合，在不降低体内生物活性的同时增加其体内停留时间，从而最终提高其体内生物活性。
- 一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法-201010170700.7
- 孙黎;蔡慧丽;何艳;杨美花;裴广强;林崧;余东新 - 厦门特宝生物工程股份有限公司
- 2010-05-07 - 2010-09-15 - C07K14/535
- 本发明公开了一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，采用的大肠杆菌表达重组人粒细胞刺激因子rhG-CSF为包涵体形式，包括下述纯化步骤：(1)采用优化的包涵体洗涤液配方进行洗涤，获得高纯度的包涵体；(2)对洗涤后的包涵体样品进行超滤复性；(3)复性后样品通过Capto ViralQ柱层析；(4)然后通过Superdex 75凝胶过滤柱层析，得到纯化后的重组人粒细胞刺激因子rhG-CSF原液。本发明具有工艺简便快速，步骤少，收率高，纯度高，样品各项指标均符合欧洲药典要求，在兼顾环保的同时，提高药品的安全性、可控性和有效性的特点。
- 一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子的纯化方法-201010170695.X
- 孙黎;蔡慧丽;何艳;杨美花;裴广强;林崧;余东新 - 厦门特宝生物工程股份有限公司
- 2010-05-07 - 2010-09-15 - C07K14/535
- 本发明公开了一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子的纯化方法，采用的大肠杆菌表达重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子rhGM-CSF为包涵体形式，包括下述纯化步骤：包涵体超滤复性→Capto S阳离子柱层析→Superdex 75凝胶过滤层析→得到药用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子rhGM-CSF原液。本发明具有工艺简便快速，步骤少，收率高，纯度高的特点，在兼顾环保的同时，提高药品的安全性、可控性和有效性，适合大规模生产。
- 粒细胞集落刺激因子-200880110315.4
- 彼得·阿蒂米克;理查德·罗斯;乔恩·塞耶斯 - 埃斯特瑞恩有限公司
- 2008-07-31 - 2010-09-08 - C07K14/535
- 本发明公开了粒细胞集落刺激因子融合多肽；编码所述多肽的核酸分子，以及使用所述蛋白的治疗方法。
- 聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体-200810062516.3
- 金荣;徐飞虎;王同映;刘晓妮;王昌梅;单剑峰;朱琳;方井晋;汪军远;戎亚雯 - 杭州九源基因工程有限公司
- 2008-06-13 - 2009-12-16 - C07K14/535
- 本发明涉及一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)的制备和鉴定。通过点突变技术，将重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)18位的半胱氨酸(cys)突变为丝氨酸(ser)，再通过噬菌体展示技术表达N端突变的重组人粒细胞集落刺激因子(其中18位的半胱氨酸已突变为丝氨酸)，然后利用重组人粒细胞集落刺激因子受体筛选出具有高稳定性和生物学活性的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)。突变后的rmhG-CSF与带有氨基反应基团的聚乙二醇(PEG)反应，经分离纯化，获得了活性和稳定性更高的聚乙二醇单修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)。
- 治疗用靶向细胞因子的抗体-200780016674.9
- D·内里;M·卡斯帕;E·特拉克塞尔 - 菲洛根有限公司
- 2007-05-08 - 2009-05-20 - C07K14/535
- 本发明涉及融合蛋白，其包含对于癌胚纤连蛋白(ED-B)的胞外域或癌胚生腱蛋白的至少一种胞外域具有特异性结合亲和性的抗体、其功能性片段或功能性衍生物，所述的抗体、其功能性片段或功能性衍生物融合于选自(a)IL-10，(b)IL15，(c)IL-24和(d)GM-CSF、其功能性片段和功能性衍生物的细胞因子。本发明还涉及至少一种所述融合蛋白在制备药剂中的用途。更具体地，本发明涉及所述药剂用于治疗肿瘤或慢性炎性疾病的用途，例如动脉粥样硬化，关节炎和银屑病。
- 人G-CSF的制备方法-200780008077.1
- 桑吉夫·库玛·门迪拉塔;维伯尔·萨拉斯沃特;潘卡伊·R·帕特尔 - 卡迪拉保健有限公司
- 2007-03-05 - 2009-04-15 - C07K14/535
- 本发明公开了一种改进的高产量生产G-CSF的方法，其通过在生产期间高盐诱导增加质粒稳定性来实现。
- 糖基化的G-CSF-200780009218.1
- R·D·伊瓦瑞;G·刘;J·C·拉普;J·A·莫里斯;A·J·哈维 - 阿维季尼克斯股份有限公司;佐治亚大学研究基金会股份有限公司
- 2007-02-20 - 2009-04-08 - C07K14/535
- 本发明涉及获自具有新描述的G-CSF糖基化模式的转基因禽类所产禽蛋的粒细胞集落刺激因子。
- 专利分类
