本发明公开了一种稳定的非典型猪瘟病毒亚单位蛋白及其疫苗和制备方法和应用,其为非典型猪瘟病毒亚单位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,该亚单位蛋白具有良好的免疫原性。制备该亚单位蛋白的步骤为:1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中得到含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒;2)再将含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中;3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株;4)发酵培养3)中所述的细胞株,纯化后得到非典型猪瘟病毒亚单位蛋白。本发明制备该亚单位蛋白的方法简单、成本低、易于放大。将适量亚单位蛋白与佐剂混合后得到亚单位疫苗,该疫苗具有良好的免疫原性。
本发明公开了非洲猪瘟病毒免疫原的p49突变融合蛋白、重组载体、工程菌及制备方法和应用,所述制备方法包括:1)将含有TrxA‑p49融合蛋白的编码基因克隆至原核表达载体中,得到含有TrxA‑p49融合蛋白的编码基因的重组质粒,所述p49为p49突变蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示;2)再将步骤1)中的所述重组质粒转化至大肠杆菌细胞中,得到重组表达TrxA‑p49的菌株;3)通过培养、筛选、步骤2)中所述重组表达TrxA‑p49的菌株,得到高度表达的菌株;以及4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的菌株,纯化后得到重组可溶性表达TrxA‑p49融合蛋白。本发明克服了现有技术中的缺陷,解决了大肠杆菌中不能直接大量可溶性表达P49蛋白且产量低的问题。
本发明提供了一种狂犬病毒表面的亚单位融合蛋白tG及其制备方法和应用,所述制备方法包括:1)将如SEQ ID NO.4所示的基因序列克隆到真核表达载体中,得到含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒;2)再将含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒转染至表达细胞中;3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述表达细胞,得到高度表达的细胞株;4)发酵培养步骤3)中所述细胞株,纯化后,得到亚单位融合蛋白tG。本发明能够在大量可溶性表达tG,蛋白稳定,克服了现有技术中狂犬病毒表面G蛋白不能大规模表达等诸多问题,且制备方法简单、成本低。
本发明公开了一种重组的非洲猪瘟病毒p72亚单位可溶性融合蛋白及其制备方法和应用,所述非洲猪瘟病毒p72亚单位可溶性融合蛋白包括OPTI‑p72蛋白和一种伴侣蛋白,其中所述OPTI‑p72蛋白的核苷酸序列为经优化后的序列OPTI‑p72如SEQ ID NO.1所示。本发明能够在大肠杆菌中直接可溶性表达P72,克服了现有技术中的诸多问题,且制备方法简单、成本低。
本发明提供了一种亚单位融合蛋白CD2V‑Fc及其制备方法和应用,所述亚单位融合蛋白CD2V‑Fc含有非洲猪瘟病毒表面囊膜蛋白CD2V的胞外区和猪的抗体Fc蛋白,所述亚单位融合蛋白CD2V‑Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明能够在大量可溶性表达CD2V‑Fc,蛋白稳定,克服了现有技术中的诸多问题,且制备方法简单、成本低。