本发明属于动物传染病防制技术领域，涉及一种牛分枝杆菌卡介苗低侵袭力突变株B2801，该突变株含有牛分枝杆菌卡介苗BCG_2658的突变体基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，突变位点位于基因组2922763位点后，位于BCG_2658基因序列的748位点后，是一种新的结构基因和功能因。本发明的突变株为低侵袭力，低胞内存活能力，高生长速度，无索状结构及小菌落形态。本发明的突变株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2018864。本发明分离的突变基因及其突变株可望在牛分枝杆菌致病机理、免疫机制研究和制备防制牛结核病药物中应用。
本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及牛支原体MbovP730蛋白在自然感染和疫苗免疫鉴别中的应用。根据大肠杆菌的密码子偏爱性，对M.bovis HB0801的Mbov_730基因进行克隆，将Mbov_730基因修饰，将牛支原体色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中的色氨酸密码子UGG，进而在大肠杆菌中表达重组的牛支原体MbovP730蛋白。本发明的MbovP730蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示,该蛋白可作为抗原蛋白在制备鉴别诊断牛支原体野毒株感染和疫苗株免疫鉴别试剂盒中的应用。
本发明公开了一种牛支原体乙醇脱氢酶基因，具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，本发明还公开了一种牛支原体乙醇脱氢酶基因编码的蛋白，具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，属于动物传染病防治与生物技术领域。本发明的重组蛋白具有乙醇脱氢酶活性，能够黏附牛肺上皮细胞系细胞(EBL)，能与牛纤连蛋白(Fn)结合，同时还具有良好的免疫原性和反应原性，是牛支原体的一种毒力相关蛋白，在牛支原体致病机制研究、疫苗和诊断试剂研发中具有较好的应用前景。
本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及一种细胞共培养下牛支原体生长必需蛋白CDNPase。克隆得到牛支原体基因Mbov_0328，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该基因编码的蛋白质为环二核苷酸磷酸二酯酶(CDNPase)，其蛋白质序列如SEQ ID NO:2‑6所示。从牛支原体基因突变体库中筛选得到该基因的突变菌株，添加外源核苷或核苷酸后生长缺陷回复。突变株在PPLO固体培养基上呈现小菌落表型；蛋白组学检测发现突变株与野生株有38个差异表达蛋白，其中30个蛋白呈上调表达，8个蛋白呈下调表达。由于细胞共培养下的存活能力与毒力相关，该基因和蛋白可望在制备牛支原体药物、疫苗和检测试剂中应用。
本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及一种牛支原体分泌性黏附蛋白MbovP58。该蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。根据大肠杆菌密码子偏爱性，将Mbov_0581基因进行突变，突变后的序列如SEQ ID NO:3所示。用免疫转印法证实该蛋白为分泌蛋白，能与感染牛血清反应。用免疫荧光试验和流式细胞术检测大肠杆菌表达的重组蛋白rMbovP581对牛肺上皮细胞(EBL)的黏附，发现MbovP581对EBL细胞具有良好的黏附能力。综合该蛋白的分泌特征、免疫原性和黏附性，该蛋白可望在制备牛支原体诊断试剂、药物和疫苗中应用。
本发明属于动物生化免疫技术领域，具体涉及一组结核病相关的外周血淋巴细胞miRNA及其应用。本发明的外周血淋巴细胞hsa‑miRNA可以作为早期检测外周血淋巴细胞miRNA。所述外周血miRNA为联合使用。相关外周血hsa‑miRNA序列分别如下所述：1)hsa‑miR‑374b‑5p miRNA的序列如SEQ ID NO:1所示；2)hsa‑miR‑625‑3p的序列如SEQ ID NO:2所示；3)hsa‑miR‑362‑5p的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明还公开了扩增上述hsa‑miRNA的三条引物序列。本发明的hsa‑miRNA可以作为早期检测人结核病的标志物使用。
本发明公开了一种牛支原体假想蛋白MbovP732，该蛋白具有如序列表SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，编码所述蛋白的基因，具有如序列表SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。该蛋白具有反应原性和免疫原性，能特异性地与牛支原体野毒株反应，而不能与疫苗株反应，因此可用于鉴别牛支原体野毒株感染与疫苗株免疫。
本发明属于生化免疫和分析技术领域，具体涉及肺结核相关血清标识蛋白TIMP‐1及其应用。本发明利用细胞因子和全蛋白芯片对宿主蛋白进行筛选，提供了一种可检测肺结核相关血清生物标识蛋白即蛋白基质金属蛋白酶抑制因子TIMP‐1，该抑制因子TIMP‐1的蛋白质序列如SEQ ID NO：1所示。本发明的抑制因子TIMP‐1可在制备肺结核病血清诊断试剂盒中作为标识抗原蛋白应用。
本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及一种牛支原体多功能蛋白基因CDNPase，蛋白基因Mbov_0328是从牛支原体HB0801基因组中克隆获得。根据大肠杆菌对密码子的偏爱性，申请人对Mbov_0328基因进行了修饰，将牛支原体色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中编码色氨酸的密码子UGG，最终获得由大肠杆菌表达的重组蛋白rCDNPase。本发明克隆的蛋白的编码基因的核苷酸序列是SEQ ID NO:11中1‑969位碱基所示的序列，其蛋白质的序列如SEQ ID NO:12所示。本发明的重组蛋白具有磷酸二酯酶和超小片段核酸酶的活性。
本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及一株牛支原体NADH氧化酶的单克隆抗体。该单克隆抗体是由交瘤细胞株8B7分泌的，所述的NADH氧化酶是一种牛支原体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶，本发明修饰的NOX基因的核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。公开了NOX基因的克隆和表达及纯化步骤，重组蛋白质rNOX单克隆抗体的制备步骤以及免疫荧光检测法的建立和初步应用的步骤及效果。所述的杂交瘤细胞株8B7保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NOC2014221，该单克隆抗体能特异性地识别牛支原体。
