本发明提出鉴别MG的TS‑11疫苗株和野毒株的引物探针组合、方法及应用。其引物探针组合包括共同上游引物、共同下游引物、TS‑11疫苗株探针和野毒株探针,共同上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,共同下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;TS‑11疫苗株探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,野毒株探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;TS‑11疫苗株探针和所述野毒株探针的5’端均标以荧光报告基团,TS‑11株探针和所述野毒株探针的3’端均标以荧光淬灭基团该引物探针组合和采用该引物探针组合的Cycleave荧光PCR检测方法能够准确、高效的鉴别TS‑11疫苗株和野毒株,且具有高灵敏度、特异性、简单易操作的优点。
本发明的所述基于高分辨率溶解曲线(HRM)的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型疫苗株和野毒株鉴别诊断检测引物,由以下1对引物组成:HRM‑Ⅱ‑F:5'CACCGGAGTTAAACTTCATCGC‑3'(SEQ ID NO:1);HRM‑Ⅱ‑R:5'CCTGTGGCAGACCGGCAGATAA 3'(SEQ ID NO:2);根据草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型疫苗株和已知的Ⅱ型野毒株S2基因5’端和3’端保守区域设计而获得,疫苗株和野毒株扩增产物之间存在一个或多个固定的碱基突变位点,这些突变位点为疫苗株所特有,满足HRM对于的GCRVⅡ型疫苗株和野毒株的鉴定分析,同时本发明还根据所述基于高分辨率溶解曲线(HRM)的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型疫苗株和野毒株鉴别诊断检测引物设计出相应的检测试剂和以及检测方法
本发明公开了一种中国猪丹毒弱毒疫苗株的特异性序列及应用,申请人将猪丹毒疫苗株G4T10和GC42的DNA聚合酶IV的基因序列与猪丹毒野毒株的进行比对,发现其存在区别。中国猪丹毒弱毒疫苗株的特异性序列为SEQ ID NO.1所示。设计针对猪丹毒弱毒疫苗株的特异性引物,并结合猪丹毒种特异性引物可快速鉴定中国猪丹毒弱毒疫苗株和野毒株,适合各种样品的大批量检测,为快速检测猪丹毒临床分离株并鉴别诊断野毒株和疫苗株提供了新的技术手段。