本发明涉及一株稳定表达分泌型荧光素酶Gluc的GI型日本脑炎病毒重组毒及其构建方法与应用，利用同源重组技术，将JEV基因组cDNA分四个片段一次性克隆至低拷贝质粒pOK‑12中，并在病毒基因组全长的上游和下游分别添加T7启动子和丁型肝炎病毒的HDVR序列，从而获得GI型JEV的感染性cDNA克隆质粒pOK‑rGI；将一段Gluc‑T2A‑C34基因序列SEQ ID NO.2插入到病毒基因组中，即可获得携带有Gluc基因的重组病毒感染性cDNA克隆质粒pOK‑rGI‑Gluc。以线性化的感染性克隆质粒为模板，利用体外转录技术获得重组病毒的基因组RNA全长，并将RNA转染至BHK‑21细胞中，待细胞出现典型细胞病变时，即可获得表达Gluc蛋白的重组病毒rGI‑Gluc。该重组病毒具有遗传稳定型，感染细胞后能够分泌表达Gluc蛋白到细胞上清中，便于病毒的检测。
