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[发明专利]一种使用MOF材料富集体液中循环游离核酸的方法及其应用-CN202010187641.8有效
发明人：周翔;彭双;刘松梅;翁小成;贾宏男;冉若曦 -专利权人：武汉大学
申请日： 2020-03-17 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及体液中循环游离核酸分离富集技术领域，具体涉及一种使用MOF材料富集体液中循环游离核酸的方法，包括以下步骤：(1)处理体液样品，使得体液样品中与蛋白结合的循环游离核酸从蛋白‑核酸复合体中释放出来；(2)将MOF材料加入到步骤(1)中处理后的溶液中，吸附其中循环游离的核酸；(3)将步骤(2)中吸附了循环游离的核酸的MOF材料分离；(4)使用EDTA破坏步骤(3)中吸附了循环游离的核酸的MOF材料，释放出吸附的核酸；(5)对步骤(4)中释放出的核酸进行纯化，得到循环游离DNA和循环游离RNA。本发明的方法富集效率高，成本低，使用范围广，兼容度高。
一种使用 mof 材料富集体液循环游离核酸方法及其应用

[发明专利]RNA中次黄嘌呤的高通量测序检测方法-CN202110291810.7在审
发明人：周翔;危琦;韩少卿;袁可欣;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2021-03-18 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供一种RNA中次黄嘌呤的高通量测序检测方法，包括如下步骤：步骤1)：用高碘酸钠溶液对RNA样品进行处理；步骤2)：将步骤1)处理后的RNA样品用Endonuclease V进行酶切反应；步骤3)：将步骤1)处理后的RNA样品和步骤2)酶切反应后的RNA样品分别进行文库构建；步骤4)：对步骤3)得到的两组文库测序，比较两组测序结果，确定富集reads，回溯富集reads的酶切位点找到突变的位点，即找到次黄嘌呤修饰位点。其高特异性、高灵敏度，操作简便。
rna 次黄嘌呤通量检测方法

[发明专利]基于CRISPR的多色、正交、高灵敏度的RNA成像方法-CN202111508264.4在审
发明人：周翔;翁小成;唐恒;彭俊然 -专利权人：武汉大学
申请日： 2021-12-10 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR的多色、正交、高灵敏度的RNA成像方法，属于RNA成像技术领域。本发明基于Cas13 sgRNA和适配子，设计了插入具有重复结构适配子的sgRNA‑适配子，利用其与的dCas13b的结合，建立了一种多色、高效、正交的RNA成像方法。本发明的设计提高了sgRNA‑适配子的稳定性，并在不影响靶向性的前提下提高信噪比，实现低丰度RNA的成像和RNA相互作用的可视化。本发明具有普适性，可针对不同靶标RNA设计spacer序列进行荧光成像；本发明在进行多靶标多色成像时，只需一种dCas13b蛋白和几种sgRNA‑适配子，减少了蛋白设计成本和相关的实验操作。
基于 crispr 多色正交灵敏度 rna 成像方法

[发明专利]一种基于RNA连接标签的低样本量m6-CN202111066944.5在审
发明人：周翔;翁小成;秦珊珊;韩少卿 -专利权人：武汉大学
申请日： 2021-09-13 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于RNA连接标签的低样本量m6A高通量测序方法，属于RNA的高通量测序领域。本发明方法包括以下步骤：将含有不同barcode标签序列的3’linker进行磷酸化处理、腺苷化处理；腺苷化处理后的3’‑linker分别连接到不同来源的打断后的RNA样品上，混合样品后留出input对照样品用于RNA‑seq，剩余混合样品进行m6A抗体免疫沉淀得到IP样品用于m6A‑seq，最终得到二代测序文库并测序；根据barcode序列对测序数据进行拆分和分析，得到初始单个样本的RNA‑seq及m6A‑seq信息。本发明可同时实现多个临床低样本量样品的m6A抗体免疫沉淀以及建库测序。
一种基于 rna 连接标签样本 base sup

[发明专利]涉及乙氧二羟丁酮衍生物的组合物和方法-CN201980045569.0在审
发明人：何川;翁小成;吴桐 -专利权人：芝加哥大学
申请日： 2019-05-08 - 公布日： 2021-02-12 - 主分类号： A61K31/357 文献下载
摘要：实施方案涉及允许在活细胞中快速和可逆地标记单链核酸的N3‑乙氧二羟丁酮试剂及其衍生物和相关方法。例如，一个方面涉及用于在活细胞中可逆标记单链鸟嘌呤碱基的方法，这产生用于全转录组RNA二级结构绘制和RNA G‑四联体预测的有效体内方法。
涉及乙氧二羟丁酮衍生物组合方法

[发明专利]RNA中N⁶-甲基腺苷的化学脱甲基方法-CN201410586145.4有效
发明人：周翔;吴晋军;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2014-10-28 - 公布日： 2015-01-07 - 主分类号： C07H19/167 文献下载
摘要：本发明涉及用化学方法特异性的使RNA中N⁶-甲基腺苷脱甲基化，具体方法如下：双氧水和碳酸氢铵在水相中反应生成过氧碳酸HCO₄^-，之后N⁶-甲基腺苷N⁶位上的N原子作为亲核试剂进攻HCO₄^-，经历N⁶-过氧甲基胞嘧啶（oxm⁶A），N⁶-羟甲基胞嘧啶（hm⁶A）和N⁶-醛基胞嘧啶（f⁶A）的中间产物后，最终脱甲基生成腺苷。
rna sup 甲基腺苷化学方法

[发明专利]一种定位定量检测DNA和RNA中6-甲基氨基嘌呤的方法-CN201410316151.8有效
发明人：周翔;王少儒;田沺;王佳琪;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2014-07-04 - 公布日： 2014-09-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种定位定量检测DNA和RNA中6-甲基氨基嘌呤的方法。通过对DNA和RNA中6-甲基氨基嘌呤的检测来反映核酸的甲基化水平：6-甲基氨基嘌呤的存在会降低DNA复制和RNA逆转录时的底物活性，在DNA复制和RNA转录过程中，有甲基化位点出现时，将不会发生链延伸；因此，可以通过掺入脱氧核苷三磷酸进行链延伸来达到区分甲基化和非甲基化序列的目的，同时可以对DNA和RNA的特定位点的甲基化水平做出定量评估。本发明可很好地用在DNA和RNA的核苷酸分离中的6-甲基氨基嘌呤分析上，是一种简便的检测DNA和RNA中腺嘌呤甲基化程度的方法。
一种定位定量检测 dna rna 甲基氨基嘌呤方法

[发明专利]一种microRNA检测探针和检测microRNA的方法-CN201310126387.0无效
发明人：周翔;彭双;王少儒;田沺;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2013-04-12 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种microRNA检测探针和检测microRNA的方法。检测探针，由三部分组成，中间区域为与靶标microRNA互补的单链DNA，所述单链DNA的一端连着DNA酶，作为信号输出部分，所述单链DNA另一端为标记上的生物素。待测体系中加入探针，探针的单链DNA与标靶microRNA互补配对，DSN选择性的消化DNA-RNA杂交的DNA链，RNA循环使用。加入链霉亲和素磁珠，通过铁磁体将磁珠连同未反应生物素标记的探针从水溶液中去除。溶液部分仍然用于进一步的信号输出反应。本发明的检查方法采用DSN放大加上核酶放大，是一个低背景高灵敏度特异性强的检测microRNA方法。
一种 microrna 检测探针方法

[发明专利]一种检测DNA中5-甲基胞嘧啶的化学方法-CN201210427481.5有效
发明人：周翔;王天露;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2012-10-30 - 公布日： 2013-02-06 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种检测DNA中5-甲基胞嘧啶的化学方法，该方法采用的两种化合物分别为取代的苯磺酰氯胺钠盐和取代的苯磺酰溴胺钠盐，具体检测步骤如下：先用取代的苯磺酰氯胺钠盐与带荧光标记的DNA中的胞嘧啶反应，再用取代的苯磺酰溴胺钠盐与带荧光标记的DNA中的胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶反应，然后用哌啶处理，通过比较DNA聚丙烯酰胺变性胶中两个反应的DNA带，可以清楚的看到5-甲基胞嘧啶的位置和个数。
一种检测 dna 甲基胞嘧啶化学方法

[发明专利]一种microRNAs荧光检测探针-CN201210411766.X无效
发明人：周翔;王少儒;田沺;翁小成;肖珩 -专利权人：武汉大学
申请日： 2012-10-24 - 公布日： 2013-01-30 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种microRNA荧光检测探针，该探针为折叠结构，包括：末端区，该区域为双链结构；环状区，为单链结构，包括待测靶标的互补序列以及间隔序列，间隔序列不与探针的其它序列形成二级结构。该探针末端区能保持探针折叠型结构的相对稳定，在加入含有检测对象的样品时，折叠型结构打开，加入与检测探针的末端区互补的引物，并加入不具外切酶活性的DNA聚合酶，通过引物延伸以及相应的链置换释放出microRNA，并使探针恢复产生荧光信号，通过产生的检测荧光信号来检测相应的靶microRNA。通过设计针对不同RNA的探针且标记不同的荧光，则可以实现不同microRNA的同时检测。
一种 micrornas 荧光检测探针

[发明专利]一种miRNA检测探针和可视化检测miRNA的方法-CN201210133660.8有效
发明人：周翔;王少儒;田沺;翁小成;肖珩 -专利权人：武汉大学
申请日： 2012-05-03 - 公布日： 2012-08-01 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种miRNA检测探针和可视化检测miRNA的方法。本发明的miRNA检测探针包括三个部分：靠近3'端为G-四链体形成序列，中间是待测靶标miRNA互补序列，5'端为干扰序列。探针在通常条件下为hairpin结构，加入靶标后，由于DNA-RNA杂合体的碱基对数与稳定性均高于干扰序列形成的DNA双链，hairpin结构将打开。打开的hairpin结构在双链特异内切酶的作用下可释放出G-四链体形成序列，再在钠钾离子作用下使之形成G-四链体，与Hemin组装从而产生有过氧化物酶活性的催化剂。本发明检测miRNA的方法只需一条探针，产生的信号可视化，而且不需昂贵仪器。
一种 mirna 检测探针可视化方法

[发明专利]五位醛基脱氧尿苷的荧光检测方法-CN201210044877.1有效
发明人：周翔;郭璞;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2012-02-27 - 公布日： 2012-08-01 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明涉及一种检测脱氧胸苷氧化突变成五位醛基脱氧尿苷的化学方法：将4-甲氧基邻苯二胺或邻苯二胺作为检测试剂，二硫苏糖醇作为抗氧化剂，并溶解于10mM的pH=4.5的醋酸缓冲液中作为检测试样；检测试样在有氧的室温条件下反应3小时后，用荧光光度分析仪检测空白试样和检测试样，发现：4-甲氧基邻苯二胺作为检测试剂时，峰值发生位移至475nm，或邻苯二胺作为检测试剂时，峰值发生位移至430nm。本发明用简单易得的4-甲氧基邻苯二胺和邻苯二胺与5-醛基脱氧尿苷在醋酸缓冲液中生成可发出荧光的化合物，从而荧光检测出脱氧胸苷氧化突变的存在。
五位醛基脱氧荧光检测方法

[发明专利]溶酶体靶向的荧光物质及其合成方法-CN201010505360.9无效
发明人：周翔;吴志国;田沺;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2010-10-13 - 公布日： 2011-02-02 - 主分类号： C09K11/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种溶酶体靶向的荧光物质，结构式如下：上述化合物的合成方法：以三氟乙酸作为溶剂和反应催化剂，用4-溴苯胺和多聚甲醛反应生成溴取代溴取代的中间产物，再通过Heck反应，将溴用4-乙烯基-N，N-二甲基苄胺取代。本发明方法有效应用Heck反应，合成路径简单，产率较高，得到的产物性质稳定，具有可见光荧光发射以及溶酶体靶向作用。
溶酶体靶向荧光物质及其合成方法

[发明专利]具有诱导产生核酸交联作用的化合物及其制备方法和用途-CN200610166538.5无效
发明人：周翔;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2006-12-29 - 公布日： 2007-08-08 - 主分类号： C07C391/00 文献下载
摘要：本发明涉及具有诱导产生核酸交联作用的结构如右下式的化合物。本发明上述化合物可以产生两个反应中心与DNA产生交联作用，提高药物活性。上述化合物的合成方法：在碱性条件下将2，6－二甲基苯酚、联苯酚或对苯二酚中的酚羟基保护，再在将其转变成苄溴，苄溴基在硼氢化钠和二苯二硒的作用下被取代成硒苯基，最后通过脱保护得到化合物1、化合物2或化合物3。本发明合成条件要求不高，步骤简单成熟；药物必须在诱导条件下才能产生DNA的交联能力，可以在到达靶目标后再发挥其药效，减少副作用；可以通过氧化剂诱导，应用广泛，满足不同条件的需要。
具有诱导产生核酸交联作用化合物及其制备方法用途

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