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[发明专利]一种CRISPR-MCPN载体及其构建方法、应用-CN202310577474.1在审
发明人： 牟彦双;徐倩倩;刘忠华;姜超前;耿立爽;王金鹏;李鑫禹 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2023-05-22 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种CRISPR‑MCPN载体及其构建方法、应用，属于基分子生物学领域。本发明CRISPR‑MCPN载体可以实现在同一个细胞中达到多水平调控、提高基因调控的效率。所述CRISPR‑MCPN载体包括CRISPR‑Cas9基因调控组件、tRNA‑array序列、融合在sgRNA的茎环中RNA发夹序列、适配体‑RNA结合蛋白和基因调控结构域。所述CRISPR‑MCPN载体及其构建方法使一个单一启动子能够在一个单一的转录本中同时表达多个蛋白和gRNAs，从而实现一个单独载体可以使激活、抑制、甲基化和去甲基化四种功能在同一细胞中独立作用。
一种 crispr mcpn 载体及其构建方法应用

[发明专利]一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用-CN202210856638.X在审
发明人： 牟彦双;刘忠华;郭晓晨;耿立爽;姜超前 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用，属于基因工程技术领域。为了提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率以及多基因编辑的效率的技术问题。本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，所述诱导剂为Nedisertib或/和ssODN‑M。该方法对单个基因或同时对多个基因提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率。
一种提高 crispr cas9 同源重组修复效率诱导剂方法以及应用

[发明专利]一种附加型CRISPR/Cas9表达载体及其构建方法与应用-CN201910212739.1有效
发明人： 牟彦双;李佳男;刘忠华;姜超前;王玥;矫彦文 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2019-03-20 - 公布日： 2022-10-11 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：一种附加型CRISPR/Cas9表达载体及其构建方法与应用，属于细胞工程领域。为了解决现有的CRISPR/Cas表达系统易整合到宿主细胞基因组，破坏基因组内序列的问题，本发明提供了一种附加型CRISPR/Cas9表达载体，该载体为含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，是指含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，所述S/MAR序列，其核苷酸如SEQ ID NO：1所示；所述S/MAR序列位于该载体中能编码蛋白的编码区序列和bGH poly(A)序列之间。本发明提供的附加型CRISPR/Cas9表达载体，可以游离在染色体外表达Cas9蛋白和单链的引导RNA，可用于基因敲除研究。
一种附加 crispr cas9 表达载体及其构建方法应用

[发明专利]一种猪冻精解冻稀释液及其配制方法-CN201710802837.1有效
发明人：翁晓刚;牟彦双;张宇霆;蔡铭铭;宋健;刘忠华 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2017-09-08 - 公布日： 2018-11-02 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：一种猪冻精解冻稀释液及其配制方法，本发明属于猪冻精解冻技术领域。本发明要解决的技术问题是猪冷冻精液在解冻稀释过程中极易发生精子的氧化损伤。本发明的组分：D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚乙烯醇、庆大霉素、黄芪多糖和白藜芦醇。方法：一、将D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚乙烯醇，用双蒸水配制成水溶液；二、置于26℃水浴锅中平衡至充分溶解并且pH值稳定；三、除菌滤器过滤；四、使用前30分钟加入庆大霉素、黄芪多糖和白藜芦醇。本发明有效地产生抗氧化作用，降低了冻精解冻稀释过程剧烈稳定变化对精子的氧化损伤。
解冻乙二胺四乙酸二钠氯化钾葡萄糖柠檬酸三钠白藜芦醇黄芪多糖聚乙烯醇庆大霉素碳酸氢钠氧化损伤稀释液稀释果糖精子种猪配制配制成水溶液抗氧化作用除菌滤器解冻技术冷冻精液双蒸水水浴锅有效地过滤溶解平衡

[发明专利]一种小鼠胚胎干细胞单细胞融合方法-CN201810552641.6在审
发明人：刘忠华;牟彦双;郭佳;方园;厉雪纯 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2018-10-26 - 主分类号： C12N15/06 文献下载
摘要：一种小鼠胚胎干细胞单细胞融合方法,属于细胞工程技术领域。针对细胞融合效率低的问题，本发明提供了一种小鼠胚胎干细胞单细胞融合方法，是以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象，用含质量分数0.25％胰酶的消化液将mESC消化成单细胞，利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对，在含有50％聚乙二醇中培养1min，随后将细胞继续培养7天，获得小鼠胚胎干细胞融合细胞。本发明适用于动物育种的研究或单克隆抗体的生产。
小鼠胚胎干细胞融合细胞工程技术细胞融合效率单克隆抗体细胞动物育种聚乙二醇融合细胞细胞凝集细胞融合质量分数消化液构建胰酶一对一消化生产研究

[发明专利]一种猪鼠细胞单细胞融合方法-CN201810553064.2在审
发明人：刘忠华;牟彦双;郭佳;方园;厉雪纯 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2018-10-26 - 主分类号： C12N15/08 文献下载
摘要：一种猪鼠细胞单细胞融合方法，属于细胞工程技术领域。本发明针对目前异种细胞融合效率低的问题，提供了一种单细胞融合方法,以小鼠胚胎干细胞与猪多能性干细胞或猪成纤维细胞作为细胞融合对象，用含质量分数为0.25％的胰酶的消化液将猪、鼠细胞消化成单细胞，经培养后，利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对，在含有质量分数为50％的聚乙二醇中培养1min，随后将细胞继续培养7天，获得猪鼠单细胞的融合细胞。本发明适用于动物育种研究或单克隆抗体的生产。
鼠细胞融合质量分数种猪小鼠胚胎干细胞多能性干细胞细胞工程技术猪成纤维细胞单克隆抗体细胞动物育种聚乙二醇融合细胞细胞凝集细胞融合异种细胞消化液构建胰酶一对一消化研究生产

[发明专利]一种提高体外受精胚胎发育率的方法-CN201310608158.2有效
发明人：刘忠华;郇延军;牟彦双;孔庆然;朱江;吕明 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2013-11-26 - 公布日： 2018-06-26 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高体外受精胚胎发育率的方法，在确定卵母细胞成熟培养时间范围的基础上，检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量，将卵母细胞体外成熟培养至谷胱甘肽含量下降前进行体外受精。本发明为今后体外受精胚胎的生产和相关科学研究奠定了基础。
体外受精胚胎谷胱甘肽成熟卵母细胞卵母细胞成熟发育成熟培养体外受精卵母科学研究检测生产

[发明专利]一种特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列及其应用-CN201710483310.7在审
发明人： 牟彦双;翁晓刚;刘忠华;吕嘉伟;郭佳 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2017-06-23 - 公布日： 2017-10-03 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列及其应用，涉及一种sgRNA导向序列及应用。该sgRNA导向序列为CGTAGTACTCGAGGCGCGCG。本发明提供的sgRNA导向序列可通过CRISPR/Cas9系统敲除或编辑IRS1基因，进而消除IRS1的表达，为制备IRS1转基因猪奠定基础。本发明应用于基因工程领域。
一种特异靶向 irs1 基因 sgrna 导向序列及其应用

[发明专利]一种特异靶向猪IGFBP3基因的sgRNA导向序列及应用-CN201710483275.9在审
发明人： 牟彦双;刘忠华;尹智;翁晓刚 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2017-06-23 - 公布日： 2017-08-29 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种特异靶向猪IGFBP3基因的sgRNA导向序列及应用，涉及一种sgRNA导向序列及应用。该sgRNA导向序列为CGTCTCGCGCTTGGACTCAG。本发明提供的sgRNA导向序列可通过CRISPR/Cas9系统敲除或编辑IGFBP3基因，进而消除IGFBP3的表达，为制备IGFBP3转基因猪奠定基础。本发明应用于基因工程领域。
一种特异靶向 igfbp3 基因 sgrna 导向序列应用

[实用新型]一种新型教室用黑板擦-CN201621244909.2有效
发明人：郑志慧;牟彦双 -专利权人：黑龙江东方学院
申请日： 2016-11-21 - 公布日： 2017-06-30 - 主分类号： B43L21/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种教学工具，更具体的说是一种新型教室用黑板擦，使用者可以向擦体内注水，从而在擦黑板时不会扬起粉笔灰尘。橡胶储水槽设置在本体与擦体上，球体与橡胶储水槽相接触，凹槽Ⅱ设置在本体上，推杆Ⅱ设置在凹槽Ⅱ中，密封条安装在推杆Ⅱ的一端，拨动板的一端与推杆Ⅱ相连接，拨动板的另一端与轨道活动连接，轨道设置在本体上，弹簧Ⅱ套装在推杆Ⅱ上，并且弹簧Ⅱ的一端与推杆Ⅱ相连接，弹簧Ⅱ的另一端与凹槽Ⅱ相接触；固定件安装在橡胶储水槽上，通孔设置在固定件上，挡水板的一端与固定件相连接，挡水板的另一端与橡胶储水槽相接触，弹簧Ⅲ的两端均与挡水板相连接；水管与橡胶储水槽连通，出水口设置在水管上。
一种新型教室黑板擦

[实用新型]一种思想政治教育用教材固定装置-CN201620198901.0有效
发明人：郑志慧;牟彦双 -专利权人：黑龙江东方学院
申请日： 2016-03-15 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： A47B23/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种思想政治教育教具，更具体地说涉及一种思想政治教育用教材固定装置，靠书板能够通过紧固调节装置改变高低位置，以适应不同身高的人，左挡书架和右挡书架能够防止教材合上，活动轮能够使整个装置自由移动，以满足教师的课堂需要。靠书板上设置有托书板，并且托书板位于靠书板的中间。横条固定在竖板的上端。左挡书架安装在横条的左端，并且左挡书架与横条活动连接。右挡书架安装在横条的右端，并且右挡书架与横条活动连接。靠书板安装在竖板上，并且靠书板与竖板活动连接。紧固调节装置安装在靠书板上，并且位于靠书板的下端。竖板固定在底座上，并且位于底座的中间。活动轮设置有四个，并且分别安装在底座底面的四个角上。
一种思想政治教育教材固定装置

[发明专利]猪基因组中外源基因整合位点的检测方法-CN201010251752.7无效
发明人：刘忠华;牟彦双;孔庆然 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2010-08-12 - 公布日： 2011-01-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：猪基因组中外源基因整合位点的检测方法，本发明涉及外源基因整合位点的检测方法。本发明解决了现有外源基因整合位点的检测方法操作复杂，误差较大的问题。方法：一、分别针对TgInS1、TgInS2和TgInS3外源基因插入基因组中的位点进行PCR扩增；二、电泳检测，即实现了猪基因组中外源基因整合位点的检测。本发明的方法操作简单，且与现有的外源基因整合位点的检测方法相比较，人为误差小，检测结果准确。
基因组中外基因整合检测方法

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