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[发明专利]双基因定点整合通用型CAR-T细胞的制备方法及其应用-CN202210657743.0在审
发明人：彭作翰;刘佳玫;豆亚丽;徐之艳;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2022-06-10 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及制备双基因敲入的通用型CAR‑T细胞的方法。所述方法包括将基因编辑物质递送至T细胞以敲除B2M基因和TRAC基因；和将修复模板载体递送至T细胞以将CAR基因和B2M‑HLA‑E基因敲入TRAC或B2M位点。所述方法简便高效，可一步实现多基因敲入与敲除。
基因定点整合通用型 car 细胞制备方法及其应用

[发明专利]同时靶向CD7和CD19的双特异通用型CAR-T细胞及其制备方法-CN202111663969.3在审
发明人：彭作翰;刘佳玫;豆亚丽;徐之艳;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-04-19 - 主分类号： C12N15/864 文献下载
摘要：本发明涉及同时靶向CD7和CD19的双特异通用型CAR‑T细胞及其制备方法。所述方法包括：将基因编辑物质递送至T细胞以剪切TRAC和CD7基因组DNA或剪切TRAC、CD7和B2M基因组DNA，以及使用重组腺相关病毒递送模版DNA以将靶向CD7‑CD19双靶点CAR基因定点整合入TRAC、CD7或B2M基因组位点。本发明的方法具有高细胞得率、简易的工艺步骤和安全的基因编辑方式，并且所得的双特异通用型CAR‑T细胞具有更好的疗效。
同时靶向 cd7 cd19 特异通用型 car 细胞及其制备方法

[发明专利]融合一代靶向CD7 CAR和二代靶向BCMA的双靶点通用CAR-T细胞及制备方法-CN202111663968.9在审
发明人：彭作翰;刘佳玫;豆亚丽;刘敏;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： C12N15/864 文献下载
摘要：本发明涉及融合一代靶向CD7 CAR和二代靶向BCMA的双靶点通用CAR‑T细胞及制备方法。所述方法包括：将基因编辑物质递送至T细胞以剪切TRAC和CD7基因组DNA或剪切TRAC、CD7和B2M基因组DNA，以及使用重组腺相关病毒递送模版DNA以将靶向CD7‑BCMA双靶点CAR基因定点整合入TRAC、CD7或B2M基因组位点。本发明的方法更安全，具有高细胞得率、简易的工艺步骤和安全的基因编辑方式，并且所得的双特异通用型CAR‑T细胞具有更好的疗效。
融合一代靶向 cd7 car 二代 bcma 双靶点通用细胞制备方法

[发明专利]CRISPR-Cas9高效敲除原代T细胞基因的方法及其应用-CN201810636410.3有效
发明人：彭作翰;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2018-06-20 - 公布日： 2022-02-22 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明涉及CRISPR‑Cas9高效敲除原代T细胞基因的方法及其应用。本发明具体涉及一种提高CRISPR‑Cas9敲除原代T细胞基因的效率的方法，所述方法包括向T细胞递送Cas9mRNA和化学修饰的sgRNA。该方法可应用于各种CAR‑T细胞、TCR‑T细胞、TIL细胞的制备。
crispr cas9 高效细胞基因方法及其应用

[发明专利]通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的制备及其应用-CN201810636413.7有效
发明人：彭作翰;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2018-06-20 - 公布日： 2022-02-18 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的制备及其应用。本发明具体涉及一种制备靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的方法，所述方法包括将基因编辑物质递送至T细胞以剪切TRAC和B2M基因；和将靶向CD19 CAR和B2M‑HLA‑E融合基因克隆至修复模板载体中以同时向T细胞导入靶向CD19 CAR和B2M‑HLA‑E融合基因同源重组修复模板。所述通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞具有异体移植排斥反应小、产量高、安全性高、即时可用和适用范围广等优点。
通用型靶向 cd19 抗原嵌合受体细胞制备及其应用

[发明专利]一种高效纯化大量PCR产物的凝胶层析方法及其应用-CN202010718012.3在审
发明人：彭作翰;刘瑗;徐之艳;张蕊;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2020-07-23 - 公布日： 2022-01-25 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效纯化大量PCR产物的方法及其应用。具体地，本发明提供了一种纯化双链DNA的方法，其中利用用于大分子的填料通过凝胶层析方法进行纯化，特别地所采用的填料是Sepharose 6 Fast Flow。纯化的双链DNA可以用作基因敲入的修复模版，例如用于将CAR基因定点整合至T细胞以制备CAR‑T细胞。通过本发明的方法，可以大批量纯化PCR产物，纯化的双链DNA纯度高并且可有效去除PCR体系中残余的DNA聚合酶、引物和dNTP，纯化得率高(可达80％)，并且操作简单，成本低，特别是洗脱液可以是PBS缓冲液、水及其他中性溶液，利于纯化双链DNA后续的应用。
一种高效纯化大量 pcr 产物凝胶层析方法及其应用

[发明专利]非病毒式定点敲入方法及其在CAR-T细胞治疗中的应用-CN202010607601.4在审
发明人：彭作翰;李玏;张蕊;刘瑗;豆亚丽;叶亚平 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2020-06-30 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及非病毒式定点敲入方法及其在CAR‑T细胞治疗中的应用。具体地，本发明利用修饰的引物进行模版DNA的PCR扩增，并且使用修饰的模版DNA作为供体DNA进行基因定点敲入，其中所述修饰的引物包含：i)5’‑硫代磷酸(PS)修饰连同5’‑生物素‑三甘醇(Biotin‑TEG)修饰；或ii)5’‑锁核酸(LNA)修饰。相较于先前方法，本发明的方法实现了更高效的精确转导方式、更简单的CAR‑T细胞制备方式、更安全且更持久的表达以及更多变的设计。
病毒定点方法及其 car 细胞治疗中的应用

[发明专利]一种CD123结合蛋白、含其的CAR及其应用-CN202010985755.7有效
发明人：彭作翰;徐之艳;张蕊;刘佳玫;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2020-09-18 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C07K16/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种CD123结合蛋白、含其的CAR及其应用。所述CD123结合蛋白和所述CAR包含如本发明所示的序列。本发明所述的抗CD123结合蛋白和所述的CAR可以在保证对CD123高表达癌细胞的特异性杀伤时，减轻或避免对正常细胞的损伤，提高临床治疗的安全性。
一种 cd123 结合蛋白 car 及其应用

[发明专利]CRISPR-Cas9高效敲入嵌合抗原受体基因到T细胞特定基因组位点的方法及应用-CN201810634963.5有效
发明人：彭作翰;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2018-06-20 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及CRISPR‑Cas9高效敲入嵌合抗原受体基因到T细胞特定基因组位点的方法及其应用。本发明具体涉及一种将CAR基因精确敲入到T细胞目的基因组DNA的方法，所述方法包括a)采用基因编辑物质剪切目的基因组DNA，其中所述目的基因组DNA位于基因启动子区后，起始密码子和其所处的外显子3端之间；b)将CAR基因克隆至修复模版载体后导入T细胞，细胞以同源重组方式修复被剪切的目的基因组DNA，从而将CAR基因嵌入，其中所述修复模版载体为腺相关病毒载体。该方法可应用于各种CAR‑T细胞制备。
crispr cas9 高效嵌合抗原受体基因细胞特定基因组方法应用

[发明专利]实现规划情景模拟的国土空间规划系统动力学建模方法-CN202110885183.X在审
发明人：顾朝林;曹祺文;管卫华;李玏 -专利权人：清华大学
申请日： 2021-08-03 - 公布日： 2021-10-29 - 主分类号： G06F30/13 文献下载
摘要：本发明公开了一种实现规划情景模拟的国土空间规划系统动力学建模方法及装置，包括：确定模型系统边界；构建国土空间规划模型的经济、人口、社会发展、水资源、土地利用和能源子系统，确定国土空间规划模型的关键变量构成；依托新古典主义经济及水—土地—能源联结关系理论，建立子系统内部以及子系统之间的关系，构建系统的因果结构图，绘制变量要素的存流量关系图；确定国土空间规划模型的参数和初始化条件，并输入参数和方程关系；通过模型存流量检验和敏感性分析对国土空间规划模型进行检验；通过检验后的国土空间规划模型进行国土空间规划情景设计与模拟。开发一种能够综合反映国土空间特点的SD模型，促进提高国土空间规划编制的科学性。
实现规划情景模拟国土空间规划系统动力学建模方法

[发明专利]增加同种异体T细胞移植相容性的方法及其应用-CN201810634501.3在审
发明人：彭作翰;李玏 -专利权人：西安桑尼赛尔生物医药有限公司
申请日： 2018-06-20 - 公布日： 2019-12-27 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及增加同种异体T细胞移植相容性的方法及其应用。通过该方法能够高效获得同时克服同种异体T和NK细胞排斥反应的T细胞。
同种异体相容性排斥移植应用

[发明专利]一种矿体水压爆破系统与矿体水压爆破方法-CN201611155107.9在审
发明人：王曙光;李鹏锋;刘伟;连海波;郭启明;杨文冰;李玏 -专利权人：陕西地建矿业开发环境治理有限责任公司
申请日： 2016-12-14 - 公布日： 2017-08-11 - 主分类号： F42D3/04 文献下载
摘要：本发明提供一种矿体水压爆破系统与矿体水压爆破方法，该矿体水压爆破系统，包括动力装置、第一注水管路、第二注水管路、爆破管及密封体；爆破管设置于所述矿体的爆破孔内，密封体密封所述爆破孔；其中动力装置、第一注水管路和第二注水管路依次密封连接，第二注水管路的输出端穿过密封体伸入爆破孔内；爆破管内充填有炸药，炸药与引爆线连接，引爆线穿过密封体并露设于爆破孔外；第一注水管路上设置有耐高压球阀和压力计，压力计位于耐高压球阀与动力装置之间。该矿体水压爆破系统在爆破前爆破孔内的水具有一定压力，炸药起爆后，利用水的传能作用，减少了爆破能量损失；矿体围岩同时还受到动静组合加载作用，增强了爆破效果。
一种矿体水压爆破系统方法

[实用新型]一种矿体水压爆破系统-CN201621374858.5有效
发明人：王曙光;李鹏锋;刘伟;连海波;郭启明;杨文冰;李玏 -专利权人：陕西地建矿业开发环境治理有限责任公司
申请日： 2016-12-14 - 公布日： 2017-07-07 - 主分类号： F42D3/04 文献下载
摘要：本实用新型提供一种矿体水压爆破系统，包括动力装置、第一注水管路、第二注水管路、爆破管及密封体；爆破管设置于矿体的爆破孔内，密封体密封爆破孔；其中动力装置、第一注水管路和第二注水管路依次密封连接，第二注水管路的输出端穿过密封体伸入爆破孔内；爆破管内充填有炸药，炸药与引爆线连接，引爆线穿过密封体并露设于爆破孔外；第一注水管路上设置有耐高压球阀和压力计，压力计位于所述耐高压球阀与所述动力装置之间。该矿体水压爆破系统在爆破前爆破孔内的水具有一定压力，炸药起爆后，利用水的传能作用，减少了爆破能量损失；矿体围岩还受到动静组合加载作用，增强了爆破效果。
一种矿体水压爆破系统

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