本发明公开了一种同时检测猪圆环病毒III型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒的多重荧光定量专用引物组,其中,猪圆环病毒III型的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,猪圆环病毒III型的反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示,猪伪狂犬病毒的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,猪伪狂犬病毒的反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,猪细小病毒的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示,猪细小病毒的反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。本发明还提供了能够同时检测猪圆环病毒III型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒的试剂盒及其用途。本发明能够同时灵敏、准确检测猪圆环病毒III型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒。