本发明公开了一种鼠白血病病毒逆转录酶突变体及其应用,所述突变体在氨基酸序列SEQ ID NO.1的基础上发生包括如下位点突变:A46、S60、V88、S92、P100、V101、R121、P127、H143、K152、P166、R211、D216、A229、D339、Q341、T420、L452、M457、T467、A500、G504、A539、L563、A589、L604、T605、S606、G608、E616、Q639或A646中的任意一个或至少两个的组合。本发明通过设计氨基酸的一个或多个不同位点的突变,获得的突变型逆转录酶展示出提高的热稳定性、更高温度下的反应活性和/或额外的有益特性(提高的存储稳定性、提高的运输稳定性、改进的复杂结构RNA模板的cDNA合成能力或提高的特异性)。
本发明公开了一种鼠白血病病毒逆转录酶突变体及其应用,所述突变体在氨基酸序列SEQ ID NO.1的基础上发生包括如下位点突变:P127、T128、L203、A46、S60、L207、D216、A254、D339、Q345、T420、A439、L452、A481、A500、G504、P515、A589、T590、A591、G602、L604、T605、S606或G608中任意一种或至少两种的组合。本发明通过设计氨基酸的一个或多个不同位点的突变,能够显著提高鼠白血病病毒逆转录酶突变体的酶活力,在相同的酶量投入下能够实现更佳的扩增效率,能够生成更多的逆转录产物。
本发明提供了一种Taq DNA聚合酶突变体Taq001,其序列如SEQ ID No.3所示。相较于如SEQ ID NO.1所示的野生型Taq DNA聚合酶的氨基酸序列而言,具有V14和G286的氨基酸位点上的替换。还公开了其编码基因、表达质粒和原核表达宿主。在10s/kb的延伸速度下,Taq001的PCR产物产量比野生型Taq DNA聚合酶提高5‑20倍,可更快完成低浓度模板的扩增;同时与野生型及截短型(即Klentaq1)Taq DNA聚合酶相比,Taq001在耐受免疫球蛋白及血红蛋白方面优势显著。