本发明提供了一种酶催化合成含有保护基的核苷的方法及组合物。其中，该方法包括：利用嘧啶核苷磷酸化酶或尿嘧啶核苷磷酸化酶，以及嘌呤核苷磷酸化酶，催化底物合成含有保护基的核苷；底物包括底物核苷、底物碱基和底物磷酸盐，底物碱基上含有保护基；嘧啶核苷磷酸化酶包括与SEQ ID NO：1所示的蛋白质PyNP具有80％以上同源性的蛋白质；尿嘧啶核苷磷酸化酶包括与SEQ ID NO：2所示的蛋白质UP具有80％以上同源性的蛋白质；嘌呤核苷磷酸化酶包括与SEQ ID NO：3、7或8所示的蛋白质PNP具有80％以上同源性的蛋白质。能够解决现有技术中的尚无生物合成法生产含有保护基的核苷的问题，适用于酶催化领域。
本发明提供了一种阿糖类核苷一锅法生物合成的方法及组合物。其中，阿糖类核苷一锅法生物合成的方法包括：底物、尿嘧啶核苷磷酸化酶或嘧啶核苷磷酸化酶、以及嘌呤核苷磷酸化酶，共同混合后进行生物合成，一锅法直接制备获得阿糖类核苷。尿嘧啶核苷磷酸化酶包括SEQ ID NO：1所示的UP；嘧啶核苷磷酸化酶包括SEQ ID NO：2所示的PyNP；嘌呤核苷磷酸化酶包括SEQ ID NO：3所示的PNP；底物包括阿糖尿苷和底物碱基。能够解决现有技术中生物合成两步法制备阿糖类核苷操作复杂的问题，适用于酶催化领域。
本发明提供了一种转氨酶突变体及手性胺化合物的制备方法。其中，该转氨酶突变体，包括(a)具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白质；或(b)具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的蛋白质；或(c)在(b)中的氨基酸序列的如下至少一个位点：Y89、L380、N86、Y85、T91、P83、K90、S417、S424、F301、G164、T452等，经过氨基酸突变且具有转氨酶功能的蛋白质；(d)与(a)、(b)或(c)中任一项限定的氨基酸序列具有80％以上同源性且具有转氨酶功能的蛋白质。能够解决现有技术中的转氨酶活性低的问题，适用于酶催化领域。
本发明公开了一种转氨酶突变体及其应用。该转氨酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO：1所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列，突变的氨基酸位点选自F89、K193、P243、V234、I262、Q280、V379、R416、A417及C418中的一个或多个。具有上述至少一个突变位点的转氨酶突变体，其酶活性和/或稳定性大大提高。
