本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其应用。该脱氢酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:9所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列,发生突变的氨基酸序列具有如下至少1个突变位点:第40位、第87位、第194位和第331位,且第40位的T突变为S、A或C;第87位的W突变为F、Y或H;第194位的V突变为I、L或E;第331位的R突变为A、K或M;或者,醇脱氢酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与发生突变的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列。具有上述至少一个突变位点或者保留上述突变位点且与其具有90%以上氨基酸序列同源性的醇脱氢酶突变体,其立体选择性和酶活性大大提高。
本发明公开了一种转氨酶及其应用。该转氨酶具有SEQ ID NO.2或4所示的氨基酸序列;或与SEQ ID NO.2或4所示的氨基酸序列具有至少80%同一性或经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸且具有高度立体选择性‑R构型催化活性的ω‑转氨酶活性的氨基酸序列,其中,高度立体选择性是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约1.1倍。本发明的转氨酶能够高效地合成手性纯度较高的R构型手性胺,适合手性胺合成的工业化应用。
本发明公开了一种双羰基还原酶突变体及其应用。该双羰基还原酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:9所编码的氨基酸序列发生突变的氨基酸序列,发生突变的氨基酸序列具有如下至少两个突变位点:第94位、第151位、第231位、第236位和第251位,且第94位的I突变为V、A或G;第151位的V突变为Q、N或S;第231位的F突变为W、Y或P;第236位的I突变为L、V或A;第251位的Q突变为H、R或K;或者双羰基还原酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点,且与发生突变的氨基酸序列具有90%以上同源性的氨基酸序列。具有上述突变位点的双羰基还原酶突变体酶活性大幅度提高。
本发明公开了一种R型ω-转氨酶及其应用。该R型ω-转氨酶含有SEQ ID NO.:2所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO.:2具有至少80%同一性或者经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸的具有高度立体选择性-R构型催化活性的ω-转氨酶活性的蛋白质的氨基酸序列,且不是如SEQ ID NO.:4所示的核苷酸序列所编码的氨基酸序列;高度立体选择性是指其中一个立体异构体的含量是另一个的至少约1.1倍。本发明的R型ω-转氨酶具有高度立体选择性,可以高效地合成手性纯度较高的R构型手性胺,适合用于手性胺的工业化生产。