本发明公开了一种用于哈蟆油药材DNA条形码鉴定的PCR扩增引物,该引物对的正向引物序列如SEQ ID No.1所示,反向引物序列如SEQ ID No.2所示。本发明还提供了一种获得哈蟆油药材DNA条形码的扩增方法,采用如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物进行PCR扩增,PCR扩增的条件为:94℃变性1分钟;94℃变性1分钟,50℃‑54℃退火1.5分钟,72℃延伸1分钟,35个循环;72℃延伸5分钟。采用本发明的PCR扩增引物及扩增方法,其PCR扩增特异性强,能快速有效的获得哈蟆油药材DNA条形码,使利用DNA条形码技术进行哈蟆油药材及基原动物鉴定成为可能。