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[发明专利]一种表达重组八因子的灌注培养方法-CN201510997991.X有效
发明人：程露;郑继岱;陆晖;周雪峰 -专利权人：上海莱士血液制品股份有限公司
申请日： 2015-12-25 - 公布日： 2018-10-30 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种高效表达重组八因子的灌注培养方法。本发明提供一种高效表达重组八因子的灌注培养方法，包括如下步骤：1）将重组FVIII细胞株的种子接种于反应器中进行批培养；2）当培养体系中葡萄糖含量为0.5‑1.5g/L时，使用旋转过滤灌注方法进入灌注培养模式；3）当反应器内的细胞处于一个稳态阶段，使用声频灌流方法和旋转过滤灌注方法同时进行灌注培养，维持细胞密度在2‑3*10⁷个/ml。本发明所提供的高效表达重组八因子的灌注培养方法采用声频灌流方法和旋转过滤灌注方法相结合灌流培养，细胞在整个稳定表达期内，成活率始终保持在90%以上，细胞密度可以达到2.5*10⁷个/ml左右，八因子平均表达量在18 IU/ml。
一种高效表达重组因子灌注培养方法

[发明专利]一种融合蛋白包涵体的制备方法-CN201210502694.X有效
发明人：魏荣华;丘力功;韦剑;黄明 -专利权人：广州白云山拜迪生物医药有限公司
申请日： 2012-11-30 - 公布日： 2018-10-26 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明提供一种融合蛋白包涵体的制备方法，包括以下几个步骤：工程菌破碎步骤、包涵体的洗涤步骤、包涵体变性溶解和过滤步骤。本发明的有益效果是：制备得到的包涵体变性溶解液的澄清度显著增加，滤器过滤容量亦明显增加。
一种融合蛋白包涵制备方法

[发明专利]一种海水稻胚芽中谷胱甘肽的提取方法-CN201810148215.6在审
发明人：叶盛权;李开 -专利权人：叶盛权;李开
申请日： 2018-02-13 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种海水稻胚芽中谷胱甘肽的提取方法，精选海水稻浸泡于驯化液中；置于发芽器中催芽，用水漂洗干净；干燥；粉碎；经物理场强化酶法制备谷胱甘肽，其溶解性及消化吸收性好；由本发明制备的天然生物活性物质谷胱甘肽具有护肝、解毒及提高免疫力等功能，食用方便、营养丰富，功能显著，保质期长。本物理场强化酶法制备谷胱甘肽的方法采用物理场强化，提高制备效率，缩短制备时间；由于海水稻中含有谷胱甘肽和多种氨基酸，在酶法制备的过程中同时将其含有的谷胱甘肽萃取出来，两种方法并用大大提高了谷胱甘肽的提取率；同时，由于初步分离的谷胱甘肽浓度高，在后续的处理中减少了无水乙醇的使用量，降低了制备成本。
谷胱甘肽制备酶法制备物理场水稻胚芽天然生物活性物质初步分离食用方便消化吸收氨基酸保质期发芽器水乙醇驯化液解毒漂洗催芽护肝萃取免疫力浸泡并用精选

[发明专利]一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法-CN201810478952.2在审
发明人：张辉华;李辰;谢青梅;何家尔;马静云;孙宝丽 -专利权人：佛山科学技术学院
申请日： 2018-05-16 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效的重组鸭β‑防御素‑2蛋白的生产方法，其选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甘油的YPG发酵培养基和选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甲醇的YPM诱导表达培养基分别进行摇瓶培养，装载量为10％，接种量为10％，生长期控温30℃，诱导表达期控温25℃，24h甲醇浓度为1％，培养周期为96h。本发明针对现有技术中重组鸭β‑防御素‑2蛋白的摇瓶培养进行培养条件优化，具体地优化了培养基成分、温度、装液量和甲醇浓度几个培养条件，从而有效获得更多的重组鸭β‑防御素‑2蛋白，大大提高了摇瓶培养生产重组鸭β‑防御素‑2蛋白的效率，进而为日后大规模发酵生产打下基础。
防御素蛋白摇瓶培养甲醇酵母浸出物培养条件诱导表达培养基蛋白胨控温大规模发酵发酵培养基培养周期生产重组甘油接种量装液量装载量生产优化

[发明专利]一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法-CN201810494617.1在审
发明人：刘秀霞;高雄;孙曼曼;张伟;董贵宾;杨艳坤;白仲虎 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-05-22 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法，其包括，在谷氨酸棒杆菌培养基中加入体积浓度为0.5％～10％的乙醇。本发明显著提高了谷氨酸棒状杆菌的生长和蛋白表达产量，本发明方法绿色环保无毒害、操作简单、成本低、效果好、显著提高谷氨酸棒杆菌的蛋白表达产量，具有巨大的工业应用价值。本发明在培养基中添加1％乙醇促进谷氨酸棒杆菌的生长，同样培养条件下，谷氨酸棒杆菌的重组蛋白表达量提高一倍以上。
谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达蛋白表达培养基乙醇谷氨酸棒状杆菌工业应用绿色环保培养条件生长毒害

[发明专利]一种硫酸粘菌素工业生产发酵方法-CN201510983695.4有效
发明人：陈剑慧;田歌;姜剑文;顾广州;颜卫 -专利权人：新疆天富阳光生物科技有限公司
申请日： 2015-12-24 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明提供一种硫酸粘菌素工业生产发酵方法，所述发酵方法中采用玉米粉、花生饼粉和复合酶为主要原料，所述复合酶选用淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。本发明以玉米粉为原料，大大降低了原料的成本，发酵过程中糖耗少，操作简便，效价提高到56～60万u/g。
一种硫酸粘菌工业生产发酵方法

[发明专利]一种酶促苄氧羰基-丙氨酰-谷氨酰胺的合成方法-CN201510161000.4有效
发明人：娄文勇;徐红;麻丽莎;林子超;曹诗林 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2015-04-07 - 公布日： 2018-10-09 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶促苄氧羰基‑丙氨酰‑谷氨酰胺的合成方法，包括如下步骤：(1)先将DES与水混合配成DES混合液，再将谷氨酰胺分散在DES混合液中，得到悬浊液；(2)将Z‑ALA‑OME溶解在乙醇中，配成浓度为0.3～3.0mmol/ml的溶液；(3)将步骤(1)所得悬浊液与三乙胺混合，搅拌溶解，再与含可溶性蛋白的木瓜蛋白酶粉和步骤(2)制得的溶液混合，在30‑70℃下搅拌反应1‑24h。本发明通过该方法合成Z‑Ala‑Gln产率较高，条件温和，且易分离纯化，操作简便，具有良好的工业价值。
一种酶促苄氧羰基丙氨酰谷氨酰胺合成方法

[发明专利]一种提高解淀粉芽孢杆菌Q-426环脂肽类抗生素产量的方法-CN201810320212.6在审
发明人：权春善;张丽影;吴懿;王路路;范圣第 -专利权人：大连民族大学
申请日： 2018-04-11 - 公布日： 2018-10-02 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种提高解淀粉芽孢杆菌Q‑426环脂肽类抗生素产量的方法。主要技术方案如下：(一)采用Fmoc固相法合成Pre‑ComX P10；(二)制备信号分子ComX P10；(三)解淀粉芽孢杆菌Q‑426发酵，在发酵过程中添加信号分子ComX P10；所述的解淀粉芽孢杆菌是发明人在辽宁省大连市的堆肥中分离得到，经传统和分子生物学方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。本发明在生物体系外采用化学合成的方法大量得到Pre‑ComX P10，添加到解淀粉芽孢杆菌的发酵过程中，通过人工调控提高解淀粉芽孢杆菌脂肽类抗生素的产量。
解淀粉芽孢杆菌发酵过程环脂肽抗生素生物医药技术脂肽类抗生素分子生物学堆肥方法鉴定化学合成人工调控生物体系添加信号制备信号发酵合成

[发明专利]一种氨基酸型表面活性剂的酶催化制备方法-CN201810260271.9在审
发明人：胡健;王晓军;王古琴 -专利权人：苏州芙来沃生物科技有限公司
申请日： 2018-03-27 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明提出的氨基酸型表面活性剂的酶催化制备方法，包括以下步骤：第一步：制备200～600nm磁性壳聚糖微球；第二步：以磁性壳聚糖微球为载体固化木瓜蛋白酶，获得固定化酶；第三步：以固定化酶为催化剂，催化月桂酰谷氨酸和赖氨酸缩合形成肽键，合成肽类双分子亲油亲水表面活性剂。该制备方法具有如下优点：(1)采用离子凝胶法制备得到磁性壳聚糖微球，使用壳聚糖包裹磁性微球，成本较低，反应温和，能够较大程度保持酶活，酶活在60％～99％，也利于提高酶活回收率；(2)以磁性壳聚糖微球作为载体，戊二醛为交联剂，固化木瓜蛋白酶，合成的固定化酶具有立体专一性和高效催化活性；(3)以固定化酶催化合成Pecllicer LB‑10的反应条件温和；纯化较简单，便于工业化生产。
磁性壳聚糖微球固定化酶制备酶活氨基酸型表面活性剂木瓜蛋白酶酶催化固化谷氨酸表面活性剂壳聚糖包裹立体专一性磁性微球催化合成催化活性反应条件合成肽类离子凝胶分子亲交联剂赖氨酸戊二醛油亲水缩合月桂肽键催化剂回收率催化合成

[发明专利]基于硫羟的深共晶溶剂-CN201780009483.3在审
发明人： M·伯尼茨-杜拉特;M·沙特 -专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司
申请日： 2017-02-03 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本文中报导了一种由摩尔比1:2至1:3的氯化(2‑羟乙基)三甲基铵和二硫苏糖醇和0％至10％的共溶剂组成的深共晶溶剂。
溶剂共晶三甲基铵氯化共溶剂摩尔比羟乙基硫羟苏糖

[发明专利]一种制备重组人凝血因子Ⅷ的方法-CN201610200676.4有效
发明人：赵伟;吕海丽;蒋丹;张哲文;秦宇;徐霆;郭康平;张喜全;程艳菊 -专利权人：正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司;正大天晴药业集团股份有限公司
申请日： 2016-03-31 - 公布日： 2018-09-14 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及一种制备重组人凝血因子Ⅷ的方法，具体涉及通过波浪式生物反应器培养表达重组人凝血因子Ⅷ的细胞以及从细胞培养液中分离并纯化重组人凝血Ⅷ因子。WAVE波浪生物反应器混合效率高，气液交换充分，泡沫少且剪切力低，避免了搅拌式不锈钢反应器浆叶端和气泡对细胞的伤害，因此细胞状态、细胞活率及蛋白活性均高于搅拌式不锈钢反应器。
一种制备重组凝血因子方法

[发明专利]一种抗菌素及其制备方法与应用-CN201510396965.1有效
发明人：刘杨;刘黎玲;李夏云;肖湘 -专利权人：汕头大学
申请日： 2015-07-07 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种抗菌素及其制备方法与应用，制备方法为：先将乳酸乳球菌ATCC 11454菌种活化后，挑取单菌落进行培养，离心去除菌种得到发酵液，将发酵液pH调至2后再利用旋转蒸发浓缩，再将pH调至初始值然后离心后取上清，过滤处理后得到发酵浓缩液；将发酵浓缩液与PBS缓冲液混合，再加入Triton X‑114和MgSO4构成的双水相体系，离心使双水相达到相平衡后取上相，再用PBS缓冲液稀释后制得含乳酸链球菌素和Triton X‑114的抗菌素。本发明的抗菌素对革兰氏阳性细菌有显著的抑菌效果。本发明的抗菌素包含Nisin和Triton X‑114，两者的结合使得抗菌素具有较高的效价。本发明的提取工艺简单、成本低，适用于间歇性和规模化生产加工高效价、高收率的抗菌素。
一种抗菌素及其制备方法应用

[发明专利]一种生产谷胱甘肽的方法-CN201310538982.5有效
发明人：杨晟;陶荣盛;朱傅赟;沈正权;沈青;孙梁栋;陈成 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院;中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心
申请日： 2013-11-04 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种改进的生产谷胱甘肽的方法。本发明人通过筛选重组表达宿主以及选择合适的酶进行过表达，获得了可高效转化L‑半胱氨酸、L‑谷氨酸和甘氨酸为谷胱甘肽的重组菌株，应用所述菌株可有效地提高了GSH的产量。本发明的方法可提高谷胱甘肽产量50%以上。
谷胱甘肽谷氨酸重组表达宿主半胱氨酸高效转化重组菌株甘氨酸有效地菌株筛选生产应用改进

[发明专利]重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法及其应用-CN201310253850.8有效
发明人：刘仲健;李利强;肖新菊;张丽君;罗焕亮;梁楠楠 -专利权人：深圳市兰科植物保护研究中心
申请日： 2013-06-24 - 公布日： 2018-08-10 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法及其应用。上述重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法，通过使用亲和层析法将重组菌表达的可溶性植原体免疫主导膜蛋白进行提纯，尤其是将包涵体裂解，结合利用透析法和亲和层析法对包涵体中的不溶性植原体免疫主导膜蛋白进行提纯，并通过对提纯的条件和工艺参数进行优化，从而大大提高重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化效果，提纯度可达95%，而传统方法的提纯度为60%。该方法工艺简单、易于操作，并且产出量高、降低了生产成本。
重组原体免疫主导膜蛋白纯化方法及其应用

[发明专利]一种乳酸链球菌素的提取方法-CN201810150346.8在审
发明人：钟文文 -专利权人：钟文文
申请日： 2018-02-13 - 公布日： 2018-08-07 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳酸链球菌素的提取方法，涉及一种从微生物中提取制得乳酸链球菌素的方法。本发明的乳酸链球菌素的提取方法包括以下步骤：发酵乳酸链球菌，得到乳酸链球菌发酵液；调节发酵液的pH值至4～5，震荡吸附；离心分离菌体后，用磷酸钠溶液洗涤菌体；震荡洗脱，分离得到上清液；浓缩上清液；除杂。本发明的乳酸链球菌素的提取方法操作简便、提取得到的乳酸链球菌素纯度高、稳定性强，因此适于大规模的工业化生产，具有很高的经济效益。本发明属于分子微生物技术领域。
乳酸链球菌素发酵液震荡离心分离菌体链球菌分子微生物磷酸钠溶液浓缩上清液乳酸链球菌发酵乳酸稳定性强洗涤菌体上清液除杂吸附洗脱微生物