[发明专利]一种监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型的构建方法及应用

说明书

本发明提供了一种监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型的构建方法及应用，属于动物模型构建技术领域。本发明首先构建了含真核启动子、刺突蛋白S1基因和荧光报告基因的重组表达载体，通过转染试剂将重组表达载体转染至小鼠肺脏中，S1基因和荧光报告基因在小鼠体内转录和翻译水平一致，当小鼠感染新冠病毒后，体内启动了免疫应答，产生特异性杀伤S1蛋白的细胞毒性T细胞对感染肺部细胞清除，荧光报告蛋白也会随S1蛋白一同被清除，可利用活体荧光成像系统实时监测小鼠体内荧光强度。因此，通过实时监测荧光强度实现评价小鼠体内CTLs功能强弱。本发明提供构建的可视化小鼠模型可用于新冠病毒的药物或疫苗筛选和评价。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及一种监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型的构建方法及应用。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一个大型病毒家族，可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。因此，基于小动物感染新型冠状病毒的动物模型开展体内病毒清除监测和靶向药物开发就变得尤为重要。新型冠状病毒刺突蛋白的S1段(Spike S1)为病毒包膜的外段，是目前疫苗研发药物开发的主要靶标，提示研究人员可以通过体内刺突蛋白S1的表达水平来评价特异性CTLS的功能。但目前仍没有一种简便快捷的手段能够实现来实时无创的监测体内Spike S1特异性CTLs的功能。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种体内监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型的构建方法，为实时监测体内特异性CTLs对感染细胞的清除能力提供了可能。

本发明的目的还在于提供一种体内监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型在药物筛选中的应用。

本发明提供了一种体内监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：

1)将真核启动子、荧光报告基因和编码新冠病毒刺突蛋白S1的基因插入真核表达载体中，得到重组表达载体；

2)将所述重组表达载体转染小鼠，得到可视化小鼠模型。

优选的，步骤1)中所述真核启动子、荧光报告基因和编码新冠病毒刺突蛋白S1的基因以一个融合基因片段的形式插入真核表达载体中。

优选的，所述荧光报告基因和编码新冠病毒刺突蛋白S1的基因之间用IRES片段连接。

优选的，步骤1)中所述荧光报告基因包括萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶或高斯荧光素酶。

优选的，步骤1)中所述编码新冠病毒刺突蛋白S1的基因的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

优选的，步骤1)中所述真核启动子包括CMV启动子、SV40启动子、T7启动子和PGK启动子。

优选的，步骤2)中将所述重组表达载体转染小鼠的方法是将所述重组表达载体、转染试剂和等张葡萄糖溶液混合，经尾静脉注射靶向递送至小鼠体内。

优选的，所述重组表达载体的质量、转染试剂的体积和等张葡萄糖溶液的体积比为18～22μg：3～3.5μL：100μL。

优选的，所述转染试剂为jetPEI。

本发明提供了所述构建方法得到的体内监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型在筛选或评价治疗新冠病毒感染的药物或预防新冠病毒感染的疫苗中的应用。

本发明提供了所述构建方法得到的体内监测新冠病毒刺突蛋白S1特异性CTLs功能的可视化小鼠模型在作为评价过继性细胞治疗的载体中的应用。