[发明专利]一种基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法

权利要求书

1.一种基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)设计一种DNA模板，加入含有镉离子的样品溶液、T3 DNA连接酶混合液、T3 DNA连接酶反应缓冲液以及DEPC水，孵育；当目标物镉离子存在的情况下，目标物拉近了链两端的距离，使得3’端和5’端互补配对，形成平末端；在T3 DNA连接酶的作用下，该模板环化；

(2)再加入一段与上述环化模板互补配对的寡核苷酸链，作为后续扩增反应的引物；

(3)再加入phi 29DNA聚合酶，开启滚环扩增反应，得到较长的一段核苷酸链条；

(4)在步骤(3)得到的产物中加入荧光染料SYBR Green I，使染料插入到DNA链条中，在517-537nm的激发波长下，用紫外分光光度计检测样品中的镉离子，然后在487-507nm的激发波下测得荧光强度；

(5)使用Real-Time PCR方法对步骤(4)中样品的镉离子进行检测，验证方法的准确性；

所述DNA模板为：5’P-ACTGTTGTGGTATTATTTTTGGTTGTGCAGT-OH 3’；引物序列为：5’-GGTTAATACCAC-3’。

2.根据权利要求1所述的基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述的T3 DNA连接酶是在缓冲液1中，缓冲液1含有Tris-HCl、ATP、MgCl₂、DTT、PEG 6000；

步骤(2)扩增反应的缓冲液为缓冲液2，缓冲液2含有Tris-HCl、MgCl2、(NH4)₂SO₄、DTT：

步骤(4)中的荧光染料SYBR Green I是在溶液3中，溶液3含有Tris-HCl、EDTA。

3.根据权利要求2所述的基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法，其特征在于，步骤(3)是步骤(2)所得产物与缓冲液2、BSA、dNTP、Phi 29DNA聚合酶以及DEPC水，孵育。

4.根据权利要求1所述的基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法，其特征在于，步骤(4)是分别取步骤(3)所得反应溶液，加入SYBR Green I以及去离子水，将混合液孵育，最终在517-537nm的激发波长下，用紫外分光光度计进行检测，然后在487-507nm的激发波长下测得样品的荧光强度。

5.根据权利要求1所述的基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法，其特征在于，步骤(1)中镉离子浓度为0-100nM。