[发明专利]一种增强1-磷酸果糖激酶基因转录水平的谷氨酰胺转氨酶高产菌株及其制备与发酵方法

权利要求书

1.一种茂原链霉菌C2，其特征在于，所述菌株的分类名为茂原链霉菌Streptomycesmobaraensis C2，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M2020194，保藏日期为2020年6月10日。

2.一种谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS104，其特征在于，所述菌株通过增强1-phosphofructokinase基因SMDS_3792的转录水平获得。

3.如权利要求2所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS104，其特征在于，所述菌株通过在如权利要求1所述的茂原链霉菌C2中利用人工强启动子kasOp*过量表达来源于茂原链霉菌C2的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792后获得。

4.如权利要求2或3所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS104，其特征在于，所述菌株的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792过量表达；和/或，所述菌株含有人工强启动子kasOp*过量表达来源于茂原链霉菌C2的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792的表达盒；和/或，所述1-phosphofructokinase基因SMDS_3792的序列如SEQ ID NO.1所示。

5.如权利要求4所述的谷氨酰胺转氨酶高产菌株TGS104，其特征在于，所述表达盒含有人工强启动子kasOp*、1-phosphofructokinase基因SMDS_3792、转录终止序列。

6.一种增强1-phosphofructokinase基因SMDS_3792的转录水平以提高谷氨酰胺转氨酶发酵水平的方法，其特征在于，通过在茂原链霉菌C2中利用人工强启动子kasOp*过量表达来源于茂原链霉菌C2的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792，进而提升谷氨酰胺转氨酶产量；

所述方法的具体步骤如下：

第一步：设计并构建用于过量表达1-phosphofructokinase基因SMDS_3792的整合型质粒载体pTDS104；

第二步：利用整合型质粒载体pTDS104，在受体菌茂原链霉菌C2染色体上插入一个拷贝的来源于如权利要求1所述的茂原链霉菌C2的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792，并通过抗性和PCR验证筛选得到基因过量表达的重组突变株TGS104；

第三步：将培养的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792过量表达突变株TGS104的孢子接种于种子培养基中，25-35℃、180-220rpm的条件下培养20-24h，以8-15％的接种量转接至发酵培养基中，25-35℃、180-220rpm的条件下发酵28-32h，收集发酵液并进行酶活检测。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述整合型质粒载体pTDS104的构建方法为：通过PCR扩增得到954bp的1-phosphofructokinase基因SMDS_3792序列的PCR片段，通过酶切连接的方法连入整合型质粒pDR3-K*的NdeI/EcoRI位点，获得所述整合型质粒载体pTDS104。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述种子培养基包括甘油1-3w/v％，酵母提取物0.5-1w/v％，鱼粉蛋白胨2-3w/v％，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.5w/v％，K₂HPO₄·3H₂O 0.1-0.5w/v％，pH 7.4；

所述发酵培养基包括甘油1-3w/v％，酵母提取物0.5-1w/v％，鱼粉蛋白胨2-3w/v％，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.5w/v％，K₂HPO₄·3H₂O 0.1-0.5w/v％，发酵促进剂0.1-0.3w/v％，pH7.4。