[发明专利]一种重组人铁蛋白分离纯化方法在审
| 申请号： | 201811622011.8 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN109503704A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 崔晴晴;张洪;时鑫;倪春杰 | 申请（专利权）人： | 平湖优谱生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 杭州五洲普华专利代理事务所(特殊普通合伙) 33260 | 代理人： | 龚玉平 |
| 地址： | 314200 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 洗脱缓冲液 目的蛋白 重组人铁蛋白 分离纯化 菌泥 大肠杆菌菌液 二次分离 过滤处理 三次分离 疏水层析 阳离子层 阴离子层 缓冲液 铁蛋白 回收率 加热 发酵 溶解 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)发酵后的大肠杆菌菌液离心后获得菌泥，菌泥溶解于缓冲液后进行加热、离心或过滤处理，得滤液；
2)利用阴离子层析对步骤1)得到的滤液进行分离，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液；
3)利用阳离子层析对步骤2)得到含铁蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液；
4)利用疏水层析对步骤3)得到的含铁蛋白的洗脱缓冲液进行三次分离，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液。
2.如权利要求1所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中溶解菌泥的缓冲液为5-100mM PB或Tris pH7.0，所述步骤1)中加热的温度范围和时间分别为70-75℃、5-15min，所述步骤1)中过滤处理采用0.22um中空纤维或滤膜过滤处理方式。
3.如权利要求1所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)具体为：取装有阴离子层析介质的层析柱，用0.5M NaOH处理层析柱，之后用结合缓冲液平衡层析柱后上样，再用清洗缓冲液清洗杂质，用洗脱缓冲液进行洗脱，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液，用0.5M NaOH清洗结合能力比较强的杂质，用10mM NaOH保存层析柱。
4.如权利要求3所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)中阴离子层析介质为Q Bestarose High Performance、Q Sepharose High Performance、DEAEBestarose High Performance、DEAE Sepharose High Performance、SOURCE Q、QBestarose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow、DEAESepharose Fast Flow、Q Bestarose Big Beads、Q sepharose Big Beads、Q BestaroseBig Beads、Q sepharose Big Beads、Diamond Q、Capto Q、Diamond Q mustang、Capto Qmustang、Capto DEAE、Diamond DEAE或Diamond DEAE mustang中的一种；
所述步骤2)中结合缓冲液为5-100mM PB或Tris pH7.0；
所述步骤2)中清洗缓冲液为5-100mM PB或MES pH6.0或5-100mM PB或Tris 0.1M NaClpH7.0中的一种；
所述步骤2)中洗脱缓冲液为5-100mM NaAC pH4.5或5-100mMPB 0.25M NaCl pH7.0；
所述步骤2)中结合缓冲液平衡层析柱至流出液的PH和电导均与结合缓冲液的PH和电导保持一致。
5.如权利要求1所述的重组人铁蛋白分离纯化方法，其特征在于：所述步骤3)具体为；取装有阳离子层析介质的层析柱，用0.5M NaOH处理层析柱，之后用结合缓冲液平衡层析柱后上样，洗脱缓冲液进行洗脱，收集含铁蛋白的洗脱缓冲液，用0.5M NaOH清洗结合能力比较强的杂质，用10mM NaOH保存层析柱。
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- 2017-12-08 - 2019-08-27 - C07K14/47
- 本公开涉及用于产生被称为最佳制造的stradomer的生物活性蛋白的经过优化的方法。本公开进一步提供了在治疗包含自身免疫性疾病、炎性疾病或感染性疾病的疾病和病状方面有用的组合物和方法。
- 一种孤独症血清多肽标志物PF4-A及其应用-201610097011.5
- 黄辰;杨娟;宋土生 - 西安交通大学
- 2016-02-22 - 2019-08-23 - C07K14/47
- 本发明公开了一种孤独症血清多肽标志物PF4‑A及其应用，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。该分子称为PF4‑A，是血小板因子4(PF4)的一个片段，其精确分子量为7775道尔顿PF4‑A在孤独症患儿血清检测中呈现显著高表达，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI‑TOF‑MS)检测PF4‑A或ELISA方法测检测PF4的表达水平，可作为孤独症血清的检测方法。
- 一种具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽及其制备方法-201910479452.5
- 谢奎;侯艳梅;吴桐;詹智钧;陈瑶 - 海普诺凯营养品有限公司
- 2019-06-04 - 2019-08-16 - C07K14/47
- 本发明公开了一种具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽，所述羊乳酪蛋白水解肽的序列如SEQ ID NO.1所示。制备具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽的方法包括羊乳酪蛋白的选取、二阶段酶水解羊乳酪蛋白和分离纯化等步骤。本发明选取高质量、高稳定性的羊乳酪蛋白，通过不同的生物酶混合物，在两阶段不同的酶反应条件下对羊乳酪蛋白进行水解反应，分离纯化得到高纯度的具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽，与现有的羊乳酪蛋白产品相比，不仅更加容易消化，而且具有明显的增强免疫功能，能够显著的增强B淋巴细胞活性（增强免疫球蛋白表达），在保健食品和功能性营养品中具有良好的应用前景。
- 一种具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽及其制备方法-201910479554.7
- 谢奎;侯艳梅;吴桐;詹智钧;陈瑶 - 海普诺凯营养品有限公司
- 2019-06-04 - 2019-08-16 - C07K14/47
- 本发明公开了一种具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽，所述羊乳酪蛋白水解肽的序列如SEQ ID NO.1所示。制备具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽的方法包括羊乳酪蛋白的选取、二阶段酶水解羊乳酪蛋白和分离纯化等步骤。本发明选取高质量、高稳定性的羊乳酪蛋白，通过不同的生物酶混合物，在两阶段不同的酶反应条件下对羊乳酪蛋白进行水解反应，分离纯化得到高纯度的具有调节B淋巴细胞活性的羊乳酪蛋白水解肽，与现有的羊乳酪蛋白产品相比，不仅更加容易消化，而且具有明显的增强免疫功能，能够显著的增强B淋巴细胞活性（增强免疫球蛋白表达），在保健食品和功能性营养品中具有良好的应用前景。
- 一种制备多肽药物的方法-201310410636.9
- 宓鹏程;潘俊锋;马亚平;袁建成 - 深圳翰宇药业股份有限公司
- 2013-09-10 - 2019-08-16 - C07K14/47
- 本发明涉及一种制备多肽药物DiaPep277的方法，包含：将Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH与树脂P偶联，得到Fmoc‑Asp(OtBu)‑P；将Fmoc‑Asp(OtBu)‑P采用逐一偶联的方式固相合成，得到DiaPep277‑P；将DiaPep277‑P裂解，得到DiaPep277粗肽。
- 专利分类
