[发明专利]用于治疗或预防结晶样视网膜色素变性的基因载体及其用途

说明书

本发明涉及一种用于治疗或预防结晶样视网膜色素变性(BCD)的基因载体以及其用途。本发明所述的用于治疗或预防结晶样视网膜色素变性的基因载体，包括：包装质粒，是插入了抗CD59短肽C9的基因序列的AAV2包装质粒；以及载体质粒，是插入了人类细胞色素P450超家族蛋白CYP4V2的基因序列、抗VEGF短肽HRH的基因序列、启动子序列的AAV载体质粒。该AAV载体能够融合表达C9抗CD59短肽至病毒壳蛋白；能够实现CYP4V2及HRH共表达，补偿RPE细胞中CYP4V2基因突变所致蛋白功能缺失，可有效修复RPE细胞的正常功能，并可特异性拮抗血管内皮生长因子VEGF，延缓脉络膜增生所致的视网膜萎缩。本发明还提供了将所述的基因载体用于制备治疗或预防结晶样视网膜色素变性(BCD)的药物的用途。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种基因载体，更具体地，涉及一种用于治疗或预防结晶样视网膜色素变性(Bietti's crystalline dystrophy，BCD)的基因载体以及其用途。

背景技术

结晶样视网膜色素变性(Bietti's crystalline dystrophy，BCD)是一种可遗传的视网膜退行性眼病。患者一般于青少年阶段出现夜盲；随着病情发展，患者在角膜及眼底出现黄白色结晶状的脂结晶，并伴随视野缺失；疾病晚期，患者视网膜萎缩，并最终失明1。该病在西方属于罕见病，但是在亚洲，特别是在中国，有较高发病率(1/20000)(Hu,D.-N.(1983).Ophthalmic genetics in China.Ophthalmic Paediatrics and Genetics,2(1),39-45.)。遗憾的是，目前没有任何针对该病的有效治疗手段。临床观察表面，BCD患者失明是由于细胞色素P450家族CYP4V2基因突变导致的视网膜色素上皮细胞(Retinal pigmentepithelium,RPE)退化引发的视网膜萎缩及脉络增生所致(Xiaodong Jiao(2001).GeneticLinkage of Bietti Crystallin Corneoretinal Dystrophy to Chromosome 4q35.Am JHum Genet.2000Nov；67(5):1309–1313.)。而AAV2已经被广泛应用于治疗单基因遗传性疾病，并取得较多成果(Naso MF(2017).Adeno-Associated Virus(AAV)as a Vector forGene Therapy.BioDrugs.2017Aug；31(4):317-334.)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因载体，能够在BCD的预防和治疗中取得一定疗效。

本发明所述的用于治疗或预防结晶样视网膜色素变性的基因载体，包括：包装质粒，是插入了抗CD59短肽C9的基因序列的AAV2包装质粒；以及载体质粒，是插入了人类细胞色素P450超家族蛋白CYP4V2的基因序列、抗VEGF短肽HRH的基因序列、启动子序列的AAV载体质粒。

根据本发明所述的基因载体的进一步特征，所述CYP4V2蛋白的基因序列如SEQ IDNO:1所示；所述HRH的基因序列如SEQ ID NO:2所示；所述C9的基因序列如SEQ ID NO:3所示。

根据本发明所述的基因载体的进一步特征，所述启动子是通用启动子或者视网膜色素上皮细胞的特异性启动子。

根据本发明所述的基因载体的进一步特征，所述通用启动子是选自：CBh启动子、CAG启动子、PGK启动子、EF1α启动子。

根据本发明所述的基因载体的进一步特征，所述CBh启动子的核苷酸序列如SEQID NO:4所示；所述CAG启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述PGK启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；所述EF1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。

根据本发明所述的基因载体的进一步特征，所述特异性启动子是RPE65特异性启动子。