[发明专利]一种利用LAMP引物组定量快速检测原料乳中产耐热蛋白酶的荧光假单胞菌方法

权利要求书

1.用于LAMP检测原料乳中产耐热蛋白酶荧光假单胞菌的引物组，其特征在于由下列引物组成，

上游外引物F3：5’-GGCCGTGATTTCCTCAGC-3’，(SEQ ID NO：1)

下游外引物B3：5’-CAGGTAAGCGAAAGCCGC-3’，(SEQ ID NO：2)

上游内引物FIP：

5’-TGGGTGAAACCGGAGAAGTCCATTTTGTCAAGCGACAAACGTGGT-3’，(SEQ ID NO：3)

下游内引物BIP：

5’-GACGTTCTTTCTCCGACGTGGTTTTTGTTCTCGATGGTGACGCC-3’，(SEQ ID NO：4)。

2.权利要求1所述的原料乳中产耐热蛋白酶假单胞菌的LAMP检测引物的应用方法，其特征在于：采用上述引物组进行LAMP检测，检测体系具体为：反应体系共25μL，英国NewEngland Bio labs公司的Bst酶(8U/μL)，1.2μL，10×ThermoPol Buffer，2.5μL，外引物，F3+B3，5μmol/L，1μL；内引物FIP+BIP，40μmol/L，1μL；模板2μL；dNTP，10mM，4μL；Mg2+，100mM，2μL，灭菌ddH2O，9.3μL，反应体系共25μL。

3.权利要求2中所述的LAMP反应体系的反应条件，其特征在于：63℃温育60min。

4.根据权利要求3中所述的原料乳中产耐热蛋白酶的荧光假单胞菌的检测引物的应用方法，其特征在于向反应的扩增体系中加入显色剂SYBR Green I 1μL，当纯培养的原料乳中产耐热蛋白酶的荧光假单胞菌菌数高于3×102cfu/mL，显色结果为绿色，低于3×102cfu/mL，显色结果为橙色。