[发明专利]一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法

说明书

技术领域

本发明属于精子顶体检测技术领域，尤其涉及一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法。

背景技术

精子顶体是由精子细胞核附近的高尔基复合体所形成的，顶体呈囊泡状半球形贴附于细胞核前端表面。精子顶体内富含多糖及各种水解酶，与细胞核中所含物质显著不同。改良简便、快速和媒染的结晶紫染色法能够增强细胞的染色亲和力，再由脱色处理以测知染料与被染物之间的结合牢度。从而鉴别细胞结构间的差异，较好地显示精子与顶体的存在情况。随着科学的发展，生化检查技术对精子顶体活力的测定，均有很好的效果。然后，多数因试剂昂贵，操作复杂耗时，常常不能在基层医院推广开展。

综上所述，现有技术存在的问题是：多数因试剂昂贵，操作复杂耗时，常常不能在基层医院推广开展。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法。

本发明是这样实现的，一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法，所述改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法包括以下步骤：

步骤一，采用5％明胶水溶液20ml、0.05％戊二醛液50ml，pH7.0巴比安醋酸缓冲液100ml；0.5％台盼蓝溶液50ml；pH7.3、磷酸盐缓冲液100ml；双蒸水500ml制备改良明胶底膜片；

步骤二，采集的新鲜精液液化后，离心弃精浆，沉淀物悬浮于两倍以上pH7.3的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，36℃恒温箱放置15～20min后，取精子悬浮液均匀地铺在明胶膜片上，置37℃温箱中孵育，分别于30min及1、2、3h取出镜检。

步骤三，将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上染1～3min后，用水洗去多余燃料；滴加Lugol碘液，1min后水洗，再滴加95％酒精分色，摇动玻片至紫色不再褪色为止，流水冲洗，干后镜检。

进一步，所述步骤三中摇动玻片至紫色不再褪色时间0.5～1min，流水冲洗3～5min，干后镜检。

进一步，所述结晶紫染液由结晶紫14g和95％酒精100ml组成。

进一步，所述结晶紫染液的制备方法包括：量取饱和液20ml，加入1％草酸溶液80ml，Lugol碘液：碘化钾2g，蒸馏水10ml，碘1g，依次溶解后加蒸馏水20ml。

本发明的优点及积极效果为：采用简便、快速和媒染的结晶紫染色法能增强细胞的染色亲和力，再由脱色处理以测知燃料与被污染物之间的结合牢度，从而鉴别细胞结构间的差异，较好地显示精子顶体的情况。本发明建立的改良结晶紫染色法，利用传统的Wright-Giemsa混合染色法对照，分别对生育组和不育组进行精子顶体外形的检测，结果表明，两种染色方法都是可行的，但是本发明的染料配制方便，药品价廉，来源广；10min左右可完成染色供读片；容易操作并可重复；临床医生可迅速得到较可靠的精子顶体完整分析报告，粗略推测精子顶体内酶存活情况；有利于基层医院推广应用。

附图说明

图1是本发明实施例提供的改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法流程图。

图2和图3是本发明实施例提供的生育组孵育2小时后，精子顶体酶阳性反应。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法包括以下步骤：

S101：采用5％明胶水溶液20ml、0.05％戊二醛液50ml，pH7.0巴比安醋酸缓冲液100ml；0.5％台盼蓝溶液50ml；pH7.3、磷酸盐缓冲液100ml；双蒸水500ml制备改良明胶底膜片；

S102：采集的新鲜精液液化后，离心弃精浆，沉淀物悬浮于两倍以上pH7.3的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，36℃恒温箱放置15～20min后，取精子悬浮液均匀地铺在明胶膜片上，置37℃温箱中孵育，分别于30min及1、2、3h取出镜检；

S103：将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上染1～3min后，用水洗去多余燃料。滴加Lugol碘液，1min后水洗，再滴加95％酒精分色，摇动玻片至紫色不再褪色为止，(时间约0.5～1min)流水冲洗3～5min，干后镜检。

下面结合实验对本发明的应用效果作详细的描述。

1材料和方法

1.1染液