[发明专利]一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法

权利要求书

1.一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法，其特征在于，所述改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法包括以下步骤：

步骤一，采用5％明胶水溶液20ml、0.05％戊二醛液50ml，pH7.0巴比安醋酸缓冲液100ml；0.5％台盼蓝溶液50ml；pH7.3、磷酸盐缓冲液100ml；双蒸水500ml制备改良明胶底膜片；

步骤二，采集的新鲜精液液化后，离心弃精浆，沉淀物悬浮于两倍以上pH7.3的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，36℃恒温箱放置15～20min后，取精子悬浮液均匀地铺在明胶膜片上，置37℃温箱中孵育，分别于30min及1、2、3h取出镜检。

步骤三，将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上染1～3min后，用水洗去多余燃料；滴加Lugol碘液，1min后水洗，再滴加95％酒精分色，摇动玻片至紫色不再褪色为止，流水冲洗，干后镜检。

2.如权利要求1所述的改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法，其特征在于，所述步骤三中摇动玻片至紫色不再褪色时间0.5～1min，流水冲洗3～5min，干后镜检。

3.如权利要求1所述的改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法，其特征在于，所述结晶紫染液由结晶紫14g和95％酒精100ml组成。

4.如权利要求3所述的改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法，其特征在于，所述结晶紫染液的制备方法包括：量取饱和液20ml，加入1％草酸溶液80ml，Lugol碘液：碘化钾2g，蒸馏水10ml，碘1g，依次溶解后加蒸馏水20ml。