[实用新型]快速检测大豆致敏蛋白β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速检测大豆致敏蛋白β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸，该试纸基于双抗体夹心的原理检测β-conglycinin。

背景技术

大豆中蛋白质含量丰富，氨基酸组成平衡，且富含不饱和脂肪酸，是人体和动物体重要的植物蛋白和植物油来源。由于其种植面积广，产量大，长久以来一直被广泛应用于食品和饲料的加工原料，然而，大豆也是联合国粮农组织认定的8种最重要的食物过敏源之一，据不完全统计，大豆会导致大约0.4%的儿童产生过敏反应。这主要是因为大豆中含有一系列过敏原，这些过敏原是大豆及其制品中能够导致人或畜禽过敏的蛋白质或糖蛋白，过敏原数据库网站在2014年1月更新的数据信息显示，大豆中共存在38种过敏原，包括大豆疏水蛋白（Glym1）、大豆外壳蛋白（Glym2）、大豆抑制蛋白（Glym3）、大豆球蛋白（Glycinin）、β-伴大豆球蛋白（β-conglycinin）、大豆空泡蛋白（GlymBd30K）、胰蛋白酶抑制因子等。其中β-conglycinin大豆中最主要的致敏蛋白之一，β-conglycinin是具有较强热稳定性的致敏蛋白，直接加热并不能彻底破坏其过敏原活性，可以引发人体包括皮肤、肠胃、呼吸等方面的过敏反应，并且大量的动物试验研究也表明，β-conglycinin可以导致犊牛、仔猪和鼠等幼龄动物发生过敏反应，表现为腹泻、生长性能下降甚至死亡。

近几年，食物过敏已逐渐成为世界范围内广泛关注的食品安全问题，食品过敏原容易在婴幼儿和幼龄动物体内引起IgE（ImmunoglobulinE）抗体介导的速发型（Ⅰ型）超敏反应，从而导致肠内组胺过量释放等过敏性损伤。食物过敏问题已引起了各国食品安全监督管理部门的重视，一些发达国家为保护食物过敏人群，专门立法规定食品包装上要标注食物过敏原，我国在2012年实施的食品安全国家标准《预包装食品标签通则》（GB7718-2011）中也推荐食品包装上标注致敏物质。因此，针对食品过敏原的检测技术就显得意义重大，可为食品安全提供重要的技术依据。

大豆及其制品被广泛应用于食品和饲料加工领域，但是当其存在于婴幼儿食品以及幼龄动物饲料中，就很可能会诱发过敏反应。免疫层析试纸检测方法具有成本低、快速、便携且易操作等优点，可以用于大批量样品的定性与定量检测，在准确性、灵敏度和特异性上也能够满足要求，该法分析过程简单，用作β-conglycinin的检测有独特优势，是需要优先发展的检测技术。但目前仍没有关于大豆致敏蛋白β-conglycinin免疫层析试纸检测方法的报道，所以该方法将会成为未来大豆过敏原检测方法的一个发展方向。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题：针对现有技术存在的不足，提供一种特异、灵敏、简便、安全、快速检测β-conglycinin的免疫层析试纸。

本实用新型的技术方案：

一种快速检测β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在纤维素膜设有用β-conglycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的检测线以及用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗粒标记的β-conglycinin鼠源单克隆抗体。

所述支撑层用不吸水的韧性材料制成；样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；结合垫用玻璃纤维棉、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成；纤维素膜用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成。纤维素膜上的隐形检测线和隐形质控线为平行排列的“︱︱”直线式，或为其他类似印记。

快速检测β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸的制备方法：包括用胶体金纳米颗粒标记的β-conglycinin鼠源单克隆抗体（金标单抗）制备结合垫，用β-conglycinin兔源多克隆抗体溶液喷点隐形检测线，用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点隐形质控线，然后在支撑层上黏贴样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在所述样品垫、结合垫及吸水垫上覆盖有保护膜，在样品垫与结合垫交界处对应的保护膜上喷点有样品标记线，最后加上保护层。