[发明专利]一种提取草莓RNA的方法

权利要求书

1.一种提取草莓RNA的方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)将裂解液预热到55～65℃，每1g草莓果实或叶片粉末中加入5～10ml预热后的裂解液，在55～65℃下保温1～5分钟，其间晃动1～2次使其混合，得到混合物Ⅰ；

(2)再加入氯仿/异戊醇混合液，加入的氯仿/异戊醇混合液与裂解液等体积；混合后在15℃以上离心，收集上清液；

(3)再加入8-14M LiCl和无水乙醇，其中，加入LiCl的体积是上清液的1/6-1/3，加入无水乙醇的体积是上清液的1/10-4/10；在1～4℃放置1h～12h，2-5℃离心后，收集沉淀；

(4)将溶解液预热到55-70℃，用预热后的溶解液溶解沉淀；

(5)向步骤(4)得到的含沉淀的溶解液中加入与含沉淀的溶解液等体积的氯仿/异戊醇混合液，2-5℃离心分离得到上清液；

(6)向步骤(5)得到的上清液中加入乙醇，加入乙醇的体积为步骤(5)得到的上清液的2～3倍，-15至-25℃放置30min以上，2-5℃离心，收集沉淀；

(7)步骤(6)所得的沉淀物中加入含有75-85％乙醇的DEPC水，加入含有75-85％乙醇的DEPC水的体积为步骤(5)加入乙醇体积的0.5-1.5倍，2-5℃离心收集沉淀物；

(8)将步骤(7)所得的沉淀物放在无菌工作台上吹干，吹干后加入DEPC水使沉淀物溶解，所得混合物为草莓RNA；

其中，步骤(1)中，裂解液包括1-5％(m/V)的CTAB和1-5％的SDS。

2.根据权利要求1所述的提取草莓RNA的方法，其特征在于：步骤(1)中，裂解液用0.1-0.5％的DEPC水配置，裂解液包括1-5％(m/V)的CTAB，1-5％的SDS，1-5％的PVP-K30，80-120mM的Tris·Cl，20-30mM的EDTA，1-5M的NaCl，0.01-0.08％的亚精胺；裂解液的pH值控制在7.5-8.5。

3.根据权利要求2所述的提取草莓RNA的方法，其特征在于：将裂解液在110-125℃灭菌20-40min，使用时在每100ml裂解液中加入1-3ml的β-巯基乙醇。

4.根据权利要求3所述的提取草莓RNA的方法，其特征在于：步骤(1)中，裂解液用0.1％的DEPC水配置，裂解液包括2％(m/V)的CTAB，2％的SDS，2％的PVP-K30，100mM的Tris·Cl，25mM的EDTA，2M的NaCl，0.05％的亚精胺；裂解液的pH值控制在7。

5.根据权利要求1所述的提取草莓RNA的方法，其特征在于：步骤(4)中，溶解液包括0.5-2M的NaCl，体积百分比为0.2-1％的SDS，8-15mM的Tris，0.5-2mM的EDTA；且溶解液的pH值为7.5-8.5。

6.根据权利要求1所述的提取草莓RNA的方法，其特征在于：步骤(6)中加入的乙醇为无水乙醇。

7.根据权利要求1所述的提取草莓RNA的方法，其特征在于：氯仿/异戊醇混合液中，氯仿和异戊醇的体积比为24：1。