[发明专利]一种提取食用植物油中残留蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取食用植物油中残留蛋白的方法，属生物技术领域。

背景技术

食用油中残留的痕量蛋白是潜在的过敏原，也可用作‘分子印迹’——区分不同种类、来源甚至品牌的食用油，还可作为食用油品质和生产工艺的辅助检测指标。由于食用油的理化性质及其生产工艺特点，从非极性的食用油中提取、分离残留的蛋白质十分困难。

长期以来, 市场上各种食用油的质量参次不齐，以次充好、以假充真的情况较为严重，如将低价位或劣质油掺入高质量油中进行销售，损害消费者利益，危害消费者健康。目前，从食用油中提取足量残留蛋白质用于后续定性和定量研究的方法仍未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提取食用油的残留蛋白，为解决上述问题，本发明了提供一种快速简便的从食用油中提取残留蛋白的方法。

本发明的技术方案是以下述方式实现的：

一种提取食用植物油中残留蛋白的方法，它由以下步骤组成：

（1）向离心管中加入36～44ml食用油和9~11ml提取液混合均匀；

（2）将步骤（1）得到的食用油和提取液的混合液以8000～12000g的离心力离心4～6 min；

（3）取步骤（2）离心后的食用油和提取液的混合液的下层水相，加入2.5～3.5 ml 50%TCA，充分混合后，冰浴15～25 min；

（4）将步骤（3）得到的下层水相和TCA的混合物以8000～12000g的离心力离心8～12 min；

（5）将步骤（4）离心后的下层水相和TCA的混合物弃上清，加入1.5～2.5 ml 80%冷丙酮冲洗沉淀，回收沉淀；

（6）将步骤（5）得到的冷丙酮冲洗的沉淀以10000～14000g的离心力离心4～6 min，离心后弃上清，得蛋白质沉淀；

（7）室温晾干步骤（6）得到蛋白质沉淀。

一种提取食用植物油中残留蛋白的方法，它由以下步骤组成：

（1）向离心管中加入38～42ml食用油和9.5~10.5ml提取液混合均匀；

（2）将步骤（1）得到的食用油和提取液的混合液以9000～11000g的离心力离心4.5～5.5min；

（3）取步骤（2）离心后的食用油和提取液的混合液的下层水相，加入2.75～3.25 ml 50%TCA，充分混合后，冰浴17.5～22.5 min；

（4）将步骤（3）得到的下层水相和TCA的混合物以9000～11000g的离心力离心9～11 min；

（5）将步骤（4）离心后的下层水相和TCA的混合物弃上清，加入1.75～2.25 ml 80%冷丙酮冲洗沉淀，回收沉淀；

（6）将步骤（5）得到的冷丙酮冲洗的沉淀以11000～13000g的离心力离心4.5～5.5 min，离心后弃上清，得蛋白质沉淀；

（7）室温晾干步骤（6）得到蛋白质沉淀。

一种提取食用植物油中残留蛋白的方法，它由以下步骤组成：

（1）向离心管中加入40ml食用油和10ml提取液混合均匀；

（2）将步骤（1）得到的食用油和提取液的混合液以10000g的离心力离心5min；

（3）取步骤（2）离心后的食用油和提取液的混合液的下层水相，加入3 ml 50%TCA，充分混合后，冰浴20 min；

（4）将步骤（3）得到的下层水相和TCA的混合物以10000g的离心力离心10 min；

（5）将步骤（4）离心后的下层水相和TCA的混合物弃上清，加入2 ml 80%冷丙酮冲洗沉淀，回收沉淀；

（6）将步骤（5）得到的冷丙酮冲洗的沉淀以12000 g的离心力离心5min，离心后弃上清，得蛋白质沉淀；

（7）室温晾干步骤（6）得到蛋白质沉淀。

所述提取液由0.2% SDS, pH 7.5，0.1 M Tris-HCl, 0.5 M NaCl,10 mM DTT组成。    

相对于现有技术，本发明简便快速，1 h即可完成；适用性广，可用于各种食用油中残留蛋白质的提取分离；成本低，不需要昂贵的试剂盒；产率高。

附图说明

图1为某品牌压榨花生油中残留蛋白的SDS-PAGE电泳分析图谱。

具体实施方式

实施例1

（1）向离心管中加入36～44ml食用油和9~11ml提取液混合均匀；提取液由0.2% SDS, pH 7.5，0.1 M Tris-HCl, 0.5 M NaCl,10 mM DTT组成；