[发明专利]一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶及其制备方法

权利要求书

1.一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶，由以下重量份数的酶制剂组成：枯草芽孢杆菌培养物30-40份，酸性木聚糖酶30-50份，酸性蛋白酶20-30份，植酸酶20-30份，β-葡聚糖酶15-20份，纤维素酶10-15份，淀粉酶10-15份，β-甘露聚糖酶10-15份，果胶酶5-10份，中草药提取物10-15份，保护剂10-15份，激活剂10-15份；

所述枯草芽孢杆菌培养物的制备方法如下：枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M2013539经斜面菌种活化和一、二、三级种子培养及一级种子罐培养逐级扩大培养得到种子液；将液体种子以6%接种量接入发酵罐，培养温度30-36℃，搅拌速度200-700rpm，通风量（V/V）1:1-3,培养时间10-15h；然后以1-2℃/h降温速率缓慢降温至10-15℃，恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h降温速率缓慢降温至2-5℃，此时，将液体种子以4%接种量追加接入发酵罐，恒温培养20-30h；最后以1-2℃/h升温速率缓慢升温至10-15℃，恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h升温速率缓慢升温至30-36℃，恒温培养15-20h；发酵液经孔径10-1000μm过滤纸板粗滤，然后于10-20℃循环超滤浓缩去除水分得固形物含量为20-40%浓缩液；浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得枯草芽孢杆菌培养物；

所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖20-30份，NaCl20-30份，(NH₄)₂SO₄10-15份，半胱氨酸10-15份；

所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌30-40份，氯化钙10-20份，硫酸钠10-20份，氯化镁5-10份。

2.如权利要求1所述的一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶，其特征在于，制备枯草芽孢杆菌培养物的斜面培养基组成为：牛肉膏3-10g，氯化钠5-12g，蛋白胨10-20g，葡萄糖2-5g,(NH)₂SO₄3-5g，K₂HPO₄6-8g，CaCl₂1-3g，琼脂15-20g，中草药粉剂5-10g，蒸馏水l000mL，pH值7.0-7.2，121℃灭菌20min。

3.如权利要求1所述的一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶，其特征在于，制备枯草芽孢杆菌培养物的种子培养基组成为：酵母粉0.3-0.5%，葡萄糖1-1.5%，蛋白胨0.3-0.5%，牛肉膏0.5-0.8%，磷酸氢二钾0.8-1.5%，中草药粉剂1.5-2%，海藻糖1-3%，硫酸钙0.1%,氯化镁0.2%,柠檬酸钠0.1-0.3%，不足部分纯净水补足，pH值7.0-7.2，121-123℃灭菌30-40min。

4.如权利要求1所述的一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶，其特征在于，制备枯草芽孢杆菌培养物的种子罐培养基组成为：麦芽糊精5-15%，酵母粉0.4-0.8%，中草药粉剂1.5-2%，海藻糖1-3%，蛋白胨0.1-0.5%，玉米浆0.1-0.5%，磷酸氢二钾0.8-1.5%，硫酸镁0.05-0.1%，柠檬酸钠0.1-0.5%，不足部分纯净水补足，pH值7.0-7.2，121-123℃灭菌30-40min。

5.如权利要求1所述的一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶，其特征在于，制备枯草芽孢杆菌培养物时种子罐发酵液菌体浓度为7.0x10⁸-8.0x10⁸个/ml。

6.如权利要求1所述的一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶，其特征在于，制备枯草芽孢杆菌培养物的发酵培养基组成为：麦芽糊精50-150g，玉米粉50-60g，豆饼粉15-25g，中草药粉剂30-50g，海藻糖30-40g，酵母粉4-8g，玉米浆1-5g，硫酸铵1-3g，磷酸氢二钾1-2g，磷酸二氢钾1-2g，柠檬酸钠1-5g，消泡剂0.1-1g,纯净水l000mL，pH值7.0-7.2，121℃灭菌20min。

7.一种含中性蛋白酶的生长猪专用酶的制备方法，其特征在于，将保护剂、中草药提取物分别超微粉碎，确保粒度小于其它酶制剂，然后与枯草芽孢杆菌培养物、酸性木聚糖酶、酸性蛋白酶、植酸酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、β-甘露聚糖酶、果胶酶均匀混合，最后加入激活剂，混合均匀后密封包装即得成品含中性蛋白酶的生长猪专用酶。