[发明专利]替可克肽的制备方法有效
| 申请号： | 201310100839.8 | 申请日： | 2013-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN103159850A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 潘俊锋;覃亮政;刘建;马亚平;袁建成 | 申请（专利权）人： | 深圳翰宇药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/695 | 分类号： | C07K14/695;C07K1/20;C07K1/14;C07K1/06;C07K1/04 |
| 代理公司： | 深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙) 44285 | 代理人： | 唐华明 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 替可克肽 制备 方法 | ||
技术领域
本发明涉及多肽合成领域，特别涉及替可克肽的制备方法。
背景技术
替可克肽(Tetracosactide)为人工合成的24肽促皮质素类似物，氨基酸的排列顺序和天然促皮质素(人、牛、猪)氨基端24个氨基酸相同，与天然ACTH具有相同的生理活性。最突出的特点是一般情况下不会产生抗体反应，无严重副作用，特别适用于对于天然猪促皮质素有过敏反应或无效的患者。能诱导肾上腺增生，刺激肾上腺皮质激素，尤其是氢化可的松（皮质醇）和某些盐皮质激素如皮质酮的分泌，也能刺激雄激素的分泌，但作用较弱。对醛固酮的分泌几无影响。半衰期为3小时。2008年FDA批准诺华的替可克肽用于肾上腺皮质功能减退症的诊断。目前Randboud University正在研究其对特发膜性肾病的治疗作用。
目前替可克肽的合成主要采用全液相合成方法进行。该方法步骤繁多，合成起来花费时间较长，并且需要用到昂贵的催化剂和高压设备，因此成本高、杂质多和操作危险、收率低等缺点。有报道采用Z保护策略逐个合成，每步均采用氢化脱除保护基，步骤长，操作繁琐以及成本高，收率低。逐个偶联而导致的丝氨酸易消旋问题，在纯化过程中难以纯化。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种替可克肽的制备方法。该方法操作简单，反应时间短，收率高，D-Ser消旋杂质少，易于纯化。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种替可克肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、取第一固相载体与Pro偶联获得固相载体-Pro，再逐步偶联氨基酸，获得第一多肽-第一固相载体，第一多肽的序列如SEQ ID No.1所示；
步骤2、取第二固相载体与氨基酸偶联，获得第二多肽-第二固相载体，第二多肽的序列如SEQ ID No.2所示；
步骤3、取第二多肽-第二固相载体经第一裂解，获得第二多肽，经第一纯化后，与第一多肽-第一固相载体偶联，经第二裂解、第二纯化、冻干，即得。
第一多肽-第一固相载体具体为H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Bo c)-Val-Tyr-Pro-树脂。
第二多肽-第二固相载体具体为Boc-Ser(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-Met-Glu(OtBu)-His(Trt)-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-G ly-2-CTC。
在本发明的一些实施例中，步骤1第一固相载体与Pro偶联采用的有机碱为DIPEA、NMM、TEA、或HOBt/DIPCDI/DMAP体系。
具体的，Fmoc-Pro-OH与2-CTC树脂反应，采用的有机碱为DIPEA，NMM，TEA；Fmoc-Pro-OH与王树脂反应采用的是HOBt/DIPCDI/DMAP体系
在本发明的一些实施例中，步骤2中第二偶联的体系为PyBOP/HOBt/DIPEA、HOAt/DIPCDI、HOBt/DIPCDI、HATU/HOAt/DIPEA、TBTU/HOBt/DIPEA、HBTU/HOBt/DIPEA。
作为优选，步骤2中第二偶联的体系为TBTU/HOBt/DIPEA。
在本发明的一些实施例中，第一裂解的裂解液包括TFE和DCM。
作为优选，步骤2中第二偶联的体系为TFE与DCM的体积比为1：4。
在本发明的一些实施例中，步骤3中第一纯化具体为取第一多肽与极性溶剂混合后加入惰性溶剂析晶。
作为优选，极性溶剂选自甲醇、四氢呋喃、乙酸乙酯和二氯甲烷。
作为优选，惰性溶剂包括乙醚、正己烷、石油醚或甲基叔丁基醚。
在本发明的一些实施例中，步骤3中偶联的体系为PyBOP/HOBt/DIPEA、HOAt/DIPCDI、HOBt/DIPCDI、HATU/HOAt/DIPEA、TBTU/HOBt/DIPEA、HBTU/HOBt/DIPEA。
作为优选，步骤3中偶联的体系为HOAt/DIPCDI。
在本发明的一些实施例中，步骤3中偶联的溶剂为DCM、DMF、NMP、DMSO中的一种或两者以上的混合溶液。
在本发明的一些实施例中，步骤3中第二裂解采用的裂解液包括TFA、PhSMe、TIS、EDT和H2O。
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